氧化苦参碱对脂多糖诱导的胰腺星状细胞TLR4/NF-κB信号通路的调节作用

摘要

目的：观察氧化苦参碱（oxymatrine，OM）在脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导的胰腺星状细胞（LTC-14细胞株）中对Toll样受体4（toll-like receptor4，TLR4）通路中相关细胞因子的影响。其中包括：TLR4、髓样细胞分化因子88（myeloid differentiation factor88，MyD88）、核转录因子-kappa B(nuclear factor kappa B，NF-κB)、肿瘤坏死因子-α（Tumor Necrosis Factor-α，TNF-α）在基因和蛋白水平的表达变化。探讨OM治疗慢性胰腺炎（chronic pancreatitis，CP）纤维化的可能分子机制。
　　方法：将LTC-14细胞株分为4个组，Control组，LPS组，OM+LPS组，OM组。Control组：加无血清无双抗的培养基培养3h。LPS组：加入含浓度为10μg/ml LPS的无血清无双抗的培养基孵育3h；OM+LPS组：先加入500μg/ml的OM在无血清无双抗的培养基中孵育30min，然后加入浓度为10μg/ml LPS继续刺激3h；OM组：单纯加入含500μg/ml OM的无血清无双抗的培养基孵育3h。该实验中应用到的实验方法（1）采用免疫荧光方法检测 LTC-14细胞株 TLR4的表达。（2）应用免疫细胞化学技术了解NF-κB在细胞浆和细胞核的表达。（3）利用 Western Blot技术检测氧化苦参碱对 LPS诱导的LTC-14细胞中 TLR4、MyD88及NF-κB在蛋白水平表达的影响。（4）通过实时荧光定量PCR检测氧化苦参碱对LPS诱导的LTC-14细胞中TLR4、MyD88及NF-κB在基因水平的表达变化。（5）通过ELISA试验检测细胞培养基中TNF-α的蛋白水平。
　　结果：与Control组相比，LPS组TLR4、NF-κB在mRNA和蛋白水平上表达量显著增加，同时OM+LPS组较LPS组表达显著下降，有统计学差异（p<0.05）。OM组较Control组对比，无统计学意义。通过免疫细胞化学技术可以观察到LPS组较Control组发生显著的NF-κB核内易位,OM+LPS组较LPS组,核内易位明显减少。OM也可以下调LPS诱导的细胞培养基中TNF-α的蛋白表达，MyD88 mRNA和蛋白表达各组之间比较，无统计学差异。
　　结论：对LPS诱导的LTC-14细胞TLR4、NF-κB mRNA和蛋白表达及NF-κB向核内易位抑制作用可能是OM治疗胰腺纤维化的机制之一。

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缩略语/符号说明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

1.对象和方法

1.1对象：

1.2方法

2结果

2.1 免疫荧光技术观察OM在LPS诱导TLC-14细胞中对TLR4表达的影响

2.2 免疫细胞化学技术检测OM在LPS刺激TLC-14细胞中对NF-κB细胞核内易位的影响

2.3 Western blot研究OM对LPS诱导LTC-14细胞中TLR4、MyD88、NF-κB表达情况的影响。

2.4实时荧光定量PCR检测OM对LTC-14细胞TLR4、MyD88、NF-κB表达情况的影响。

2.5 ELISA检测OM对LPS诱导LTC-14细胞上清液中TNF-α表达情况的影响。

3讨论

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

综述: 苦参碱和氧化苦参碱抗纤维化研究进展

致谢