大鼠回肠贮袋炎的肠屏障变化研究

摘要

目的：建立大鼠回肠贮袋炎模型，研究大鼠回肠贮袋炎的肠屏障变化，并探讨其发生改变的机制。
　　方法：利用显微外科技术建立大鼠回肠贮袋模型，将模型大鼠随机分为IPAA组（接受回肠贮袋手术，术后正常饮水）和DSS组（接受回肠贮袋手术，术后第30天始，自由饮用5％DSS溶液4天），并设假手术组（接受开关腹手术，术后正常饮水）作为对照。实验期间观察记录各组大鼠体重变化、便血情况、粪便评分；术后第35天，处死全部大鼠，假手术组取末端回肠组织，IPAA组及DSS组取贮袋组织及贮袋近端回肠组织，HE染色进行组织学评分；免疫组化染色检测组织MPO、occludin蛋白表达水平；留取血标本，采用比色法测定血D-乳酸浓度；实时荧光定量PCR检测组织IL-1β、IL-6、TNF-α和IL-10的mRNA转录水平。
　　结果：各组大鼠术后体重在短期下降之后逐渐增长，术后第30-35天，DSS组体重再次持续下降，假手术组和IPAA组则继续增长；DSS组大鼠均出现血便（6/6），假手术组（0/6）和IPAA组（0/6）均无便血；DSS组粪便评分低于假手术组（P＜0.01）和IPAA组（P＜0.01），IPAA组粪便评分低于假手术组（P＜0.01）；DSS组和IPAA组贮袋的组织学评分均高于DSS组回肠、IPAA组回肠和假手术组回肠（P＜0.01），且DSS组贮袋高于IPAA组贮袋（P＜0.01），而各组回肠的组织学评分之间差异无统计学意义（P＞0.05）。DSS组和IPAA组的MPO蛋白表达水平，血D-乳酸浓度，IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA转录水平均高于假手术组（P＜0.01），且DSS组均高于IPAA组（P＜0.01）。DSS组和IPAA组的occludin蛋白表达水平和IL-10mRNA转录水平均低于假手术组（P＜0.01），且DSS组均低于IPAA组（P＜0.01）。
　　结论：
　　1.成功建立大鼠回肠贮袋模型，并使用DSS成功诱导大鼠回肠贮袋炎模型。
　　2.大鼠回肠贮袋炎模型的肠屏障结构和功能受损，受损程度和炎症程度呈正相关。
　　3.促炎因子相对增多和抗炎因子相对减少促进肠屏障受损。
　　4.针对促炎因子、抗炎因子进行的治疗，可能对肠屏障结构和功能的恢复有效。

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缩略语/符号说明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

第一部分 大鼠回肠贮袋炎模型的建立

1.1对象与方法

1.1.1实验对象和材料

1.1.2实验流程图

1.1.3大鼠回肠贮袋模型的制作

1.1.4 大鼠回肠贮袋炎模型的诱导

1.1.5 实验分组和标本获取

1.1.6一般情况及粪便评分

1.1.7组织HE染色及病理评分

1.1.8统计处理方法

1.2结果

1.2.1大鼠回肠贮袋模型制作

1.2.2大鼠回肠贮袋炎模型的诱导

1.2.3组织病理学改变及组织学评分

1.3讨论

1.3.1 大鼠回肠贮袋模型的建立

1.3.2 大鼠回肠贮袋炎模型的诱导

1.4小结

第二部分 大鼠回肠贮袋炎肠屏障变化的实验研究

2.1对象与方法

2.1.1实验对象和材料

2.1.2实验流程图

2.1.3免疫组化染色检测MPO和occludin蛋白

2.1.4比色法检测血D-乳酸浓度

2.1.5实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应检测相关炎症因子mRNA转录水平

2.1.6数据统计处理方法

2.2结果

2.2.1 MPO蛋白和occludin蛋白表达水平

2.2.2 血D-乳酸浓度

2.2.3 IL-1β、IL-6、TNF-α和IL-10的mRNA转录水平

2.2.4 MPO蛋白、occludin蛋白表达水平和血D-乳酸浓度相关性分析

2.2.5各炎症因子mRNA转录水平和MPO蛋白表达水平相关性分析

2.2.6各炎症因子mRNA转录水平和occludin蛋白表达水平相关性分析

2.2.7各炎症因子mRNA转录水平和血D-乳酸浓度相关性分析

2.3讨论

2.3.1肠屏障在疾病发生中的作用

2.3.2肠屏障受损机制和检测方法

2.3.3 MPO对大鼠回肠贮袋炎肠屏障的影响

2.3.4 促炎因子和抑炎因子对大鼠回肠贮袋炎肠屏障的影响

2.4小结

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

综述: 回肠贮袋炎的研究进展

致谢