盐酸美金刚对血管性痴呆大鼠学习记忆障碍的影响及作用机制研究

摘要

目的:
　　通过水迷宫实验，观察盐酸美金刚（memantine hydrochloride）对血管性痴呆（vascular dementia, VaD）大鼠学习记忆能力的影响；通过对大鼠海马CA3-CA1区长时程增强（long-term potentiation, LTP）及 N-甲基-D天冬氨酸受体（N-methy-Daspartate receptor, NMDAR）各亚基和脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor, BDNF）表达的测定，分析盐酸美金刚改善VaD大鼠学习记忆能力的作用机制。
　　方法:
　　将30只成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、VaD模型组和美金刚组，每组10只。VaD模型组和美金刚组采用永久性结扎双侧颈总动脉方法制作VaD大鼠模型。美金刚组于术后1周给予美金刚[10mg/(kg·d)]灌胃治疗，VaD模型组给予等量生理盐水，共干预4周。
　　于术后5周采用Morris水迷宫测试各组大鼠的学习记忆水平，包括定位航行实验和空间探索实验，计算平均逃避潜伏期及目标象限百分率。各组大鼠随机抽取6只行LTP检测各组大鼠海马区的突触可塑性，后断头取脑，用Western Blot方法测定各组大鼠海马区BDNF及NMDAR各亚基（NR1、NR2A、NR2B、NR2C、NR2D）蛋白的表达水平；各组剩余大鼠于水迷宫检测后断头取脑，用HE染色方法观察各组大鼠海马区细胞形态的变化；应用免疫组织化学方法检测各组大鼠海马区BDNF、NR1的表达。
　　结果:
　　1、Morris水迷宫测试结果
　　与假手术组比较， VaD模型组大鼠水迷宫实验逃避潜伏期显著延长（P<0.05），目标象限百分率明显下降（P<0.05）。与模型组比较，美金刚组大鼠水迷宫实验逃避潜伏期显著下降（P<0.05），目标象限百分率明显上升（P<0.05）。
　　2、LTP检测结果
　　VaD模型组大鼠海马CA3-CA1区LTP受损明显（P<0.05），美金刚组大鼠海马CA3-CA1区LTP明显优于模型组（P<0.05）。
　　3、Western Blot结果
　　与假手术组比较，VaD模型组大鼠海马区BDNF、NR1、NR2A、NR2B蛋白表达水平明显下降（P<0.05），NR2D蛋白表达增加（P<0.05）。与模型组比较，美金刚组大鼠BDNF、NR1、NR2A、NR2B蛋白的表达显著增加（P<0.05），但仍低于假手术组（P<0.05）；NR2D蛋白表达下降（P<0.05），但仍高于假手术组（P<0.05）。各组大鼠海马区NR2C蛋白表达变化无统计学意义（P＞0.05）
　　4、HE染色
　　与假手术组比较，VaD模型组大鼠海马区神经细胞数量明显减少，排列紊乱，细胞大量萎缩，细胞形态破坏，出现空泡变性、核固缩，细胞器结构不清。与模型组相比，美金刚组神经细胞数量增多，排列较整齐，细胞形态较完整，仅见少量核固缩。
　　5、免疫组化染色结果
　　VaD模型组大鼠海马CA1区锥体细胞BDNF、NR1表达量较假手术组明显减少（P<0.05），美金刚组海马CA1区锥体细胞BDNF、NR1表达量比模型组显著增多（P<0.05）。
　　结论:
　　1、永久性结扎双侧颈总动脉制作的VaD模型可以模拟人类血管性痴呆的病理机制。
　　2、美金刚可改善VaD大鼠的空间学习记忆能力及突触可塑性。
　　3、美金刚可通过上调BDNF、NR1、NR2A和NR2B的表达，下调NR2D的表达，调节突触可塑性，增强LTP，改善VaD大鼠的学习记忆水平。

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缩略语/符号说明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

1 对象和方法

1.1 主要仪器设备

1.2 实验试剂

1.3 实验动物及分组

1.4 实验方法

2 结果

2.1 Morris水迷宫行为学测试结果

2.2海马 CA3-CA1 区 LTP检测结果

2.3 Western Blot结果

2.3 光镜观察各组大鼠海马区细胞形态

2.4 免疫组化检测结果

3 讨论

3.1 VaD大鼠模型的建立

3.2 NMDAR与学习记忆的关系

3.3 BDNF与认知障碍疾病的关系

3.4 美金刚对VaD的作用及其作用机制

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

综述:脑源性神经营养因子在突触可塑性中的作用

致谢