沉默DNA甲基转移酶上调NDRG1表达对前列腺癌DU145细胞生物学行为的影响

摘要

目的：
　　通过沉默 DNA甲基转移酶上调 NDRG1基因，探讨其对前列腺癌 DU145细胞生物学行为的影响。
　　方法：
　　1.收集天津市泌尿外科研究所保存的12例行根治性前列腺切除术患者的前列腺癌组织及12例行根治性膀胱切除术或经尿道前列腺电切术患者的良性前列腺增生组织标本，通过免疫组织化学染色及RT-qPCR方法检测组织中DNMT1、DNMT3b及NDRG1的表达情况，并对结果进行统计学分析。
　　2.体外培养前列腺癌细胞系 DU145、PC-3及人正常前列腺上皮细胞系RWPE-1，通过RT-qPCR、Western blot方法检测细胞系中DNMT1、DNMT3b及NDRG1的表达情况，并对结果进行统计学分析。
　　3．参照相关资料设计DNMT1-siRNA、DNMT3b-siRNA及其阴性对照序列（ negative control， NC），分别转染 DNMT1-siRNA、DNMT3b-siRNA、DNMT1-siRNA+DNMT3b-siRNA至DU145细胞，同时设置阴性对照（NC control）及空白对照（Control）。通过RT-qPCR、Western blot方法检测细胞中DNMT1、DNMT3b和NDRG1基因表达改变。通过CCK8检测细胞增殖情况，Muse细胞状态分析仪检测细胞凋亡情况，划痕实验检测细胞迁移能力，Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力，并对结果进行统计学分析。筛选出NDRG1表达提升及细胞生物学行为改变最显著组DU145细胞进行下一步实验。
　　4.参照相关资料设计NDRG1-siRNA及其阴性对照序列，将NDRG1-siRNA转染至上述NDRG1表达提升最显著组的DU145细胞，同时设置阴性对照及空白对照。通过RT-qPCR、Western blot方法检测细胞中NDRG1基因表达改变，并进行细胞增殖能力、细胞凋亡情况、细胞迁移及侵袭能力检测，最后对结果进行统计学分析。
　　结果：
　　1.免疫组化及RT-qPCR结果显示，DNMT1、DNMT3b在前列腺癌组织中的表达高于前列腺增生组织（P<0.05），NDRG1在前列腺增生组织中的表达高于前列腺癌组织（P<0.05）。
　　2.通过RT-qPCR及Western blot检测发现，DNMT1、DNMT3b在DU145、PC-3细胞系中的表达高于RWPE-1细胞系（P<0.05），且DNMT1、DNMT3b在DU145细胞系中的表达高于PC-3细胞系（P<0.05）；NDRG1在RWPE-1细胞系中的表达高于DU145、PC-3细胞系（P<0.05）。
　　3.将DU145细胞分为5组进行转染后，通过RT-qPCR、Western blot、CCK8细胞增殖实验、Muse细胞状态分析仪检测细胞凋亡、细胞划痕实验和Transwell侵袭实验等检测发现，DNMT1-siRNA、DNMT3b-siRNA可显著抑制DNMT1、DNMT3b的mRNA和蛋白表达（P<0.05），显著提升NDRG1的mRNA和蛋白表达（P<0.05），显著抑制细胞增殖（P<0.05），促进细胞凋亡（P<0.05），减弱细胞的迁移和侵袭能力（P<0.05）。其中DNMT1-siRNA组效果最显著，共转染未见显著协同效应（P>0.05）。
　　4.转染DNMT1-siRNA至DU145细胞24h后，将这些细胞分为3组再次进行转染。通过RT-qPCR、Western blot、CCK8细胞增殖实验、Muse细胞状态分析仪检测细胞凋亡、细胞划痕实验和 Transwell侵袭实验等检测发现， NDRG1-siRNA可显著抑制NDRG1的mRNA和蛋白表达（P<0.05），显著促进细胞增殖（ P<0.05），减少细胞凋亡（ P<0.05），增强细胞的迁移和侵袭能力（P<0.05）。
　　结论：
　　1.DNMT1、DNMT3b在前列腺癌细胞中高表达，在正常前列腺细胞中低表达；NDRG1在前列腺癌细胞中低表达，在正常前列腺细胞中高表达。
　　2.NDRG1在前列腺癌细胞中发挥抑癌基因的作用，可以抑制前列腺癌细胞的增殖和侵袭。
　　3.DNMT1、DNMT3b可以通过增加NDRG1的DNA甲基化修饰降低其在前列腺癌细胞中的表达，进而促进前列腺癌细胞的增殖和侵袭，其中DNMT1发挥主要作用。
　　4.抑制DNMT1、DNMT3b可以部分恢复NDRG1在前列腺癌细胞中的表达，进而抑制前列腺癌细胞的增殖和侵袭。

目录

封面

声明

中文摘要

英文摘要

目录

缩略语/符号说明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

一、检测正常前列腺及前列腺癌中DNMT1、DNMT3b、NDRG1的表达情况

1.1 材料和方法

1.2 结果

1.3 讨论

1.4 小结

二、转染siRNA后，检测DU145细胞中DNMT1、DNMT3b、NDRG1的表达情况及细胞生物学行为的改变

2.1 材料和方法

2.2 结果

2.3 讨论

2.4 小结

三、沉默NDRG1后，检测DU145细胞生物学行为的改变

3.1 材料和方法

3.2 结果

3.3 讨论

3.4 小结

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

综述: DNA异常甲基化与前列腺癌

致谢

个人简历