肿瘤巨细胞与口腔鳞癌临床病理因素相关性研究及其相关机制初步探讨

摘要

目的：
　　探究肿瘤巨细胞（giant cancer cell，GCC）在口腔鳞癌（oral squamous cell carcinoma，OSCC）组织中的存在情况及其数目与OSCC临床病理因素的关系。并初步探究肿瘤巨细胞产生的可能机制及其对OSCC增殖、耐药和迁移能力的影响。
　　方法：
　　1、肿瘤巨细胞在OSCC中的存在情况及其数目与临床病理因素的相关性研究：收集2005年3月至2014年12月天津医科大学肿瘤医院76例OSCC患者的石蜡切片及临床病理资料。H&E染色下观察GCC与普通肿瘤细胞的形态差异，并计数GCC。免疫组织化学染色下观察GCC与普通肿瘤细胞Ki-67表达差异。分析GCC数目与OSCC临床生物学行为及预后的关系。使用SPSS18.0对收集的数据进行分析，认为P<0.05为差异具有统计学意义。
　　2、肿瘤巨细胞产生的可能机制及其对OSCC增殖、耐药和迁移能力的影响：通过CCK-8实验确定细胞乏氧的CoCl2浓度，用CoCl2对OSCC细胞系进行诱导处理，显微镜下观察GCC的形成及其产生子代细胞的过程。通过real-time PCR检测诱导前后细胞干性标记物miRNA水平表达的变化；通过western blotting检测乏氧诱导因子HIF-1α和干性标记物的蛋白水平表达变化；通过CCK-8实验检测诱导前后细胞增殖能力及耐化疗药（顺铂）能力的变化；通过划痕实验检测细胞迁移能力的变化。Western blotting检测迁移相关蛋白的表达变化。
　　结果：
　　1、GCC存在于口腔鳞癌组织中，且其细胞核体积大或含有多个细胞核，细胞核形态不规则，可呈哑铃型、分叶状等多种不规则形态，可见多个核仁。Ki-67在OSCC胞核中部分阳性表达，在GCC细胞核中均呈阳性表达。GCC细胞数与临床分期、组织学分级、化疗及复发相关。临床分期、淋巴结转移、组织学分级、局部复发及远处转移和 OS相关；临床分期、淋巴结转移、局部复发及远处转移和DFS相关。术前诱导化疗不能改善OS和DFS。GCC数目>3个/HP组OS和 DFS明显较 GCC数目≤3个/HP组者差，GCC细胞可能是影响OSCC预后的重要因素。临床分期、局部复发和远处转移是影响 OSCC患者 OS的独立预后因素；临床分期、局部复发和远处转移是影响OSCC患者DFS的独立预后因素。
　　2、以UM1为细胞模型，通过CoCl2多次处理诱导纯化形成GCC。乏氧后，大部分普通大小的肿瘤细胞被杀死，留下纯化的 GCC或者经细胞融合形成的 GCC。GCC细胞体积明显较普通肿瘤细胞大，其内可含有多个细胞核，其形态多样，通过不均分裂（出芽）产生子代细胞。Real-time PCR结果显示GCC细胞及其子代细胞的干性标记物NANOG、SOX-2在miRNA水平表达明显升高。Western blotting结果显示GCC及其子代细胞的HIF-1α及SOX-2在蛋白水平表达明显升高。诱导形成GCC后，CCK-8结果显示肿瘤细胞的增殖能力上升，耐药能力上升；划痕实验结果显示肿瘤细胞的迁移能力上升；Western blotting检测迁移相关蛋白， E-cadherin的表达下调，N-cadherin、Vimentin的表达上调。
　　结论：
　　1、肿瘤巨细胞细胞数与口腔鳞癌临床分期、组织学分级、诱导化疗和局部复发相关，可能是影响口腔鳞癌预后的重要因素。肿瘤巨细胞可能在口腔鳞癌的发展及耐药过程中发挥作用。
　　2、乏氧可诱导口腔鳞癌细胞产生肿瘤巨细胞，具有肿瘤干细胞的部分特性，肿瘤巨细胞及其子代细胞干性标记物表达上调并发生EMT，其增殖、耐药和迁移能力均增强。

目录

声明

缩略语/符号说明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

一、GCC与OSCC临床病理因素的相关性研究

1.1对象和方法

1.2结果

1.3讨论

1.4小结

二、GCC产生的可能机制及其对OSCC生物学行为的影响

2.1对象和方法

2.2结果

2.3讨论

2.4小结

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

综述: 口腔鳞癌肿瘤干细胞的研究进展

致谢

个人简历