Mal-mPEG和N,N'-二溴代乙酰乙二胺对血红蛋白修饰的研究

摘要

血红蛋白类血液代用品已被广泛研究。所采用的血红蛋白主要为人过期血和动物血。这些血源也存在着很多问题:采用动物血作为原料存在着很多潜在的问题，例如免疫系统的不良反应，动物疾病传入人体造成人畜交叉感染等;采用成人过期血作为原料，显然来源非常有限，远远满足不了需求。我们率先采用人脐带血作为原料从事血液代用品的研究。
　　 纯化人脐带血血红蛋白(PHb)和其他来源的血红蛋白一样存在一些缺点。如:易解聚为二聚体，被肾代谢掉;很高的氧亲和力，不能有效地向组织供养。为了提高脐带血血红蛋白的稳定性，我们采用N，N’-二溴代乙酰乙二胺作为聚合剂聚合脱氧人脐带血血红蛋白;用马来酰亚胺封端的甲氧基聚乙二醇5000(Mal-mPEG)对脱氧人脐带血血红蛋白进行修饰。
　　 通过讨论影响反应的因素优化了反应工艺，得到了合适的反应条件。通过SDS-PAGE和HPLC检测，氧合曲线的测定，我们得知N，N,N'-二溴代乙酰乙二胺已成功的将血红蛋白连接成为四聚体并具有生物活性。Mal-mPEG修饰后的血红蛋白分子量显著增大也仍然保持了生物活性，且得到新一代窄分子量分布的血红蛋白。N，N’-二溴代乙酰乙二胺聚合和Mal-mPEG修饰为开发以血红蛋白为基础的红细胞代用品提供了有利条件。

目录

声明

摘要

第一章 前言

1．1 红细胞代用品的分类

1．2 全氟碳化合物

1．3 血红蛋白类红细胞代用品

1．3．1 血红蛋白的结构及功能

1．3．2 mPEG轭合血红蛋白

1．3．3 多聚血红蛋白(Polyhemoglobin)

1．3．4 基因重组血红蛋白(Recombinant hemoglobin)

1．3．5 微囊化血红蛋白(Encapsulated Hemoglobin)

第二章 Mal-mPEG的合成及对血红蛋白的修饰

2．1 Mal-mPEG-PHb的目的和可实施性的理论依据

2．2 实验试剂与仪器

2．3 Mal-mPEG的合成及表征

2．3．1 Mal-mPEG的合成

2．3．2 结构表征

2．4 mPEG-Hb的合成和生物活性测定

2．4．1 实验方法

2．4．2 结果与讨论

小结

第三章 N，N’-二溴代乙酰乙二胺对血红蛋白交联

3．1 N，N’-二溴代乙酰乙二胺交联PHb可实施性的理论依据

3．2 所需试剂及仪器

3．3 实验方法

3．3．1 N，N’-二溴代乙酰乙二胺交联Hb过程

3．3．2 SDS-PAGE

3．3．3 SEC-HPLC检测

3．3．4 氧合曲线测定

3．4 结果与讨论

小结

第四章 总结论

参考文献

发表论文及参加科研情况

致谢