胸腺五肽和扶素康的固相合成及纯化

摘要

本文首先研究了胸腺五肽的Fmoc法固相合成及分离纯化，固相合成中系统地研究了缩合时间、反应溶剂、缩合剂和树脂切割条件对合成质量的影响，确立了最优的工艺条件为：以DMF为反应溶剂，HATU为缩合剂，TFA：p-甲基苯酚：EDT：水为97：0.25：0.25：2.5(V/V)的切割条件，2倍过量进行缩合反应，反应时间为3h。反应结果胸腺五肽纯度达80.36％，收率达79.68％；应用RP-HPLC法定量反应物中的Fmoc氨基酸来监控反应进程；通过对胸腺五肽粗品的分离纯化研究，确立了纯化工艺为：先用离子交换层析进行初步纯化，纯化后产品的纯度提高到90％，收率达85％；再以反相高效液相制备层析进行最终纯化。最终纯化结果纯度达到98％。两步纯化的总收率为68％。 此外，还研究了扶素康的Fmoc法固相合成及分离纯化，考察了缩合剂、缩合时间和洗涤方式对合成质量的影响，确立了最优合成工艺条件为：以HATU为缩合剂，缩合及脱保护完成后以DCM洗涤5次，各氨基酸按适当的过量倍数及缩合反应时间进行固相合成。反应结果扶素康纯度达32.30％，收率达21.02％；通过对扶素康粗品的分离纯化研究，确立了纯化工艺路线为：先用离子交换层析进行初步纯化。经层析后产品的纯度提高到78％，收率为55％；再以反相高效液相制备层析进行最终纯化。最终纯化结果纯度达95％。两步纯化的总收率为33％。

目录

文摘

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前言

第一章文献综述

1.1多肽药物的研究进展

1.2胸腺五肽的性质、功能及其制备

1.2.1胸腺五肽的理化性质

1.2.2胸腺五肽的功能、临床应用

1.2.3胸腺五肽的制备

1.3扶素康的性质、功能及其制备

1.3.1扶素康的理化性质

1.3.2扶素康的功能

1.3.3扶素康的制备

1.4固相多肽合成

1.4.1固相多肽合成的机理

1.4.2固相多肽合成的优缺点

1.4.3固相合成中的氨基酸保护策略

1.4.4肽键化学合成机制

1.4.5多肽固相合成的监测

1.5多肽的分离纯化

1.5.1离子交换层析

1.5.2反相层析

1.5.3凝胶过滤层析

1.5.4亲和层析

1.6多肽纯化方案

1.7多肽的分析方法

1.7.1质谱分析

1.7.2核磁共振

1.7.3其他分析方法

1.8本文研究的主要内容

第二章胸腺五肽的化学合成及分离纯化

2.1实验材料与仪器

2.1.1实验材料

2.1.2实验仪器

2.2固相化学合成胸腺五肽的实验方法

2.2.1固相化学合成胸腺五肽步骤

2.2.2固相化学合成胸腺五肽工艺条件的优化

2.2.3固相结合过程中自由氨基监测系统实验方法

2.2.4合成粗品中胸腺五肽的鉴定及定量分析

2.3合成胸腺五肽粗品的分离纯化实验方法

2.3.1离子交换层析分离纯化胸腺五肽粗品

2.3.2用反相高效液相制备层析的进一步纯化

2.4结果与讨论

2.4.1定量检测Fmoc-氨基酸色谱条件研究及标准曲线的建立

2.4.2RP-HPLC分析胸腺五肽标准品及标准曲线的建立

2.4.3固相化学合成胸腺五肽工艺条件的优化

2.4.4固相合成胸腺五肽过程中氨基酸缩合率的定量分析

2.4.5固相合成产物中胸腺五肽的鉴定

2.4.6合成胸腺五肽的定量分析

2.4.7胸腺五肽的分离纯化研究

2.5小结

第三章扶素康的化学合成及分离纯化

3.1实验材料与仪器

3.1.1实验材料

3.1.2实验仪器

3.2固相化学合成扶素康的实验方法

3.2.1固相化学合成扶素康的步骤

3.2.2固相化学合成扶素康工艺条件的优化

3.2.3合成粗品中扶素康鉴定及定量分析

3.3合成扶素康粗品的分离纯化实验方法

3.3.1离子交换层析分离纯化扶素康粗品

3.3.2用反相高效液相制备层析进一步纯化

3.4结果与讨论

3.4.1RP-HPLC分析扶素康标准品及标准曲线的建立

3.4.2扶素康化学合成工艺条件的优化

3.4.3合成粗品中扶素康的鉴定

3.4.4标准曲线法定量分析合成扶素康

3.4.5扶素康分离纯化工艺研究

3.5小结

第四章结论与展望

4.1结论

4.2对今后工作的建议

参考文献

发表论文情况

致谢