扶素康的固相合成及纯化

摘要

本文首先研究了36肽扶素康的Fmoc法固相化学合成.系统地研究了扶素康的Fmoc固相逐步化学合成和Fmoc固相片断缩合化学合成.Fmoc固相逐步化学合成的工艺条件为:以DMF为反应溶剂；HBTU/HOBt/DIEA为缩合剂；王树脂为固相载体；TFA/p-甲基苯酚/EDT/水(97/0.25/0.25/2.5,V/V)为切割条件,保护氨基酸2倍过量进行缩合反应.固相片断缩合化学合成扶素康中,建立了合成全保护多肽片段的合成方法:以.2-氯三苯甲基树脂和王树脂为固相载体； HBTU/HOBt/DIEA为缩合剂；DMF为反应溶剂,HOAc/TFE/DCM(1:2:7,体积比)为切割条件.在片段缩合中,系统研究了多肽片断的分段策略、片断缩合溶剂、片断缩合剂对片断缩合法合成扶素康质量的影响,确立了优化的片段缩合工艺条件为:将扶素康按残基1～10,11～20,21～25,26～36分作4段；以王树脂为固相载体；HATU/HOAt/DIEA为缩合剂(4倍过量)；DMF/DCM(1:1)为反应溶剂；每步加入的全保护肽段为1.5倍过量；缩合及脱保护完成后以DCM为洗涤溶剂洗涤5次,进行固相片段缩合反应.该条件下合成的扶素康,粗品收率达67.31﹪,按标准曲线定量分析其纯度达38.75﹪. 通过对扶素康粗品的分离纯化研究,确立了纯化工艺路线为:先用离子交换层析进行初步纯化,再以反相高效液相制备层析进行最终纯化.经离子交换层析后产品的纯度提高到78﹪,收率为55﹪；最终纯化结果纯度达95﹪.两步纯化的总收率为35﹪.

目录

文摘

英文文摘

独创性声明及学位论文版权使用授权书

前言

第一章文献综述

1.1抗艾滋病新药-扶素康的功能、性质及其制备

1.1.1扶素康的理化性质

1.1.2扶素康的制备现状

1.2多肽固相逐步合成法

1.2.1多肽固相合成的过程及原理

1.2.2多肽固相合成中的氨基酸保护策略

1.2.3多肽化学合成反应机制

1.2.4多肽固相合成的监测

1.3多肽固相片段缩合法

1.3.1多肽片段的选择

1.3.2全保护肽段的固相合成

1.3.3全保护肽段的纯化

1.3.4连接于树脂上多肽羧基末端全保护肽段的制备

1.3.5固相片段缩合

1.4多肽的分析方法

1.4.1质谱分析（Mass Spectrometry,MS)

1.4.2 HPLC纯度分析

1.4.3其他分析方法

1.5多肽的分离纯化

1.5.1离子交换层析

1.5.2反相层析

1.5.3凝胶过滤层析

1.5.4亲和层析

1.6本文研究的主要内容

第二章扶素康合成及纯化实验方法

2.1实验材料与仪器

2.1.1实验材料

2.1.2实验仪器

2.2固相化学合成扶素康的实验方法

2.2.1固相逐步化学合成扶素康步骤

2.2.2固相分段合成扶素康的方法

2.2.3固相合成过程中自由氨基监测实验方法

2.3扶素康多肽片段及扶素康粗品的分析鉴定

2.3.1多肽片段的分析鉴定

2.3.2合成粗品扶素康的分析鉴定

2.4固相片段合成扶素康工艺条件优化的研究

2.4.1全保护多肽片段切割条件的优化

2.4.2多肽片段间缩合工艺的优化

2.5化学合成扶素康粗品的分离纯化实验方法

2.5.1离子交换层析分离纯化扶素康粗品

2.5.2用反相高效液相制备层析进一步纯化

第三章实验结果与讨论

3.1扶素康多肽片段的色谱分析条件的确定

3.1.1流动相的选择

3.1.2全保护多肽片段色谱析条件的确定

3.2扶素康多肽片段的合成工艺优化及合成结果

3.2.1全保护多肽片段最佳切割条件的确定

3.2.2多肽片段的合成结果

3.3扶素康粗品的化学合成结果

3.3.1扶素康标准品的色谱分析

3.3.2扶素康标准曲线的建立

3.3.3扶素康粗品的色谱分析

3.3.4粗品扶素康的合成结果

3.4固相合成产物中扶素康的鉴定

3.4.1RP-HPLC分析确定扶素康

3.4.2质谱分析确定扶素康

3.5扶素康化学合成工艺条件的优化

3.5.1扶素康Fmoc固相逐步合成结果及讨论

3.5.2最佳分段策略的选择

3.5.3反应溶剂优化的结果比较

3.5.4缩合反应缩合剂优化的结果比较

3.5.5扶素康固相逐步合成与片段缩合合成的比较

3.6化学合成扶素康粗品的分离纯化结果

3.6.1离子交换层析纯化工艺的确定

3.6.2反相高效液相层析

3.7小结

第四章结论与展望

4.1结论

4.2展望

参考文献

发表论文情况

致谢