银杏外种皮中活性成分的提取分离及生物活性研究

摘要

银杏外种皮的提取物具有一定的杀虫杀菌活性很早就有报道,然而,一直以来在银杏的深加工产业中外种皮却苦于没有成熟的提取方法,而被当作垃圾丢弃,这不仅是一种资源浪费,更对周边环境造成了严重影响,随着银杏产业规模的不断扩大,这已成为许多种植基地政府和企业迫切要求解决的问题. 本文根据银杏外种皮有效成分的物理、化学性质,首次成功地研究出一条以外种皮为原料分离、纯化氢化白果酸的溶剂回流提取工艺路线,并对路线各步进行了优化.本路线分为六步:第一步采用75﹪乙醇提取,物料比为1:3.5,60℃ 提取2次,每次4小时.第二步采用乙醚萃取,物料比为4:1.第三步采用5﹪碳酸钠溶液萃取,物料比为7:1.第四步采用5﹪氢氧化钠溶液萃取,物料比为1:1.第五步采用盐酸中和.第六步采用铅盐沉淀法,物料比为2:1.第七步采用盐酸还原,物料比为1.5:1.最终得到氢化白果酸纯品,经高效液相色谱法测定,其纯度>90﹪. 对超声提取银杏外种皮中活性成分的工艺条件进行了研究,在超声时间、物料比、乙醇浓度三项单因素实验的基础上通过正交实验设计最终得到了最优化的提取工艺条件.黄酮提取的最优工艺条件为超声波45min；80﹪乙醇提取；物料配比60:1.氢化白果酸提取的最优工艺条件为超声波45min；80﹪乙醇提取；物料配比40:1.对超声提取和回流提取的比较实验表明在最佳提取条件下两者对于氢化白果酸的提取效果基本相同,超声提取为更经济的方法. 对银杏不同部位活性成分含量分布规律进行了研究.氢化白果酸仅在银杏外种皮中含量较高,而在叶及果梗中分布极少,且其在外种皮中含量随时间变化不明显,说明该物质在常规贮存条件下比较稳定.虹吸回流周期短的提取器提取效率较高. 对外种皮粗提液及纯化物的杀虫、杀菌活性进行了生物测定.粗提液对玉米大斑菌、小麦赤霉菌、苹果炭疽菌等多种常见农作物致病菌有较强抑制效果,对红蜘蛛、桃蚜虫的杀虫率也较高；氢化白果酸提纯物对小麦赤霉、苹果炭疽菌有较好的抑制效果,对红蜘蛛、桃蚜虫和菜青虫(5龄)致死率较高. 本课题来源于银杏深加工企业的生产实际,研究结果为企业的进一步应用奠定了基础.

目录

文摘

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前言

第一章文献综述

1.1银杏资源及其产品开发

1.1.1银杏资源

1.1.2产品开发现状

1.2银杏外种皮

1.2.1外种皮的主要成分

1.2.2银杏外种皮的活性

1.3天然植物制备生物农药研究

1.4天然产物提取分离方法

1.4.1溶剂提取原理

1.4.2超声波法提取原理

1.5活性成分的检测方法

1.5.1黄酮类化合物的测定

1.5.2氢化白果酸的测定

1.6本研究的内容与意义

第二章氢化白果酸提取工艺研究

2.1材料与方法

2.1.1材料

2.1.2实验试剂

2.1.3标准品与对照品

2.1.4实验仪器与设备

2.1.5提取工艺流程的确定

2.1.6分析检测方法

2.2结果与分析

2.2.1原料干燥处理

2.2.2乙醇提取工艺的优化

2.2.3乙醚提取工艺的优化

2.2.4碳酸钠提取工艺的优化

2.2.5氢氧化钠萃取工艺的优化

2.2.6盐酸中和工艺的优化

2.2.7铅盐沉淀工艺的优化

2.2.8盐酸还原工艺的优化

2.2.9氢化白果酸的熔点

2.2.10氢化白果酸HPLC图谱

2.2.11氢化白果酸I R图谱

2.2.12优化结果的应用

2.3本章小结

第三章超声提取工艺条件优化

3.1材料与方法

3.1.1材料

3.1.2实验试剂

3.1.3标准品与对照品

3.1.4实验仪器与设备

3.1.5提取工艺过程

3.1.6提取液中活性成分的检测

3.1.7单因素试验设计

3.1.8正交实验设计

3.1.9溶剂提取与超声提取对比实验

3.2结果与分析

3.2.1单因素实验结果

3.2.2单因素实验小结

3.2.3正交实验结果

3.2.4溶剂提取与超声提取结果比较

3.3本章小结

第四章银杏外种皮有效成分的分布规律研究

4.1材料与方法

4.1.1材料

4.1.2实验试剂

4.1.3仪器与设备

4.1.4提取过程设计

4.1.5黄酮含量的测定

4.1.6氢化白果酸含量的测定

4.2结果与分析

4.2.1黄酮在银杏不同部位的分布规律

4.2.2氢化白果酸在银杏不同部位的分布规律

4.3本章小结

第五章银杏外种皮初提物及纯化物的生物测定

5.1材料与方法

5.1.1菌种和试虫

5.1.2药品与试剂

5.1.3仪器

5.1.4实验方法

5.2结果与分析

5.2.1粗提物的抑菌结果与分析

5.2.2粗提物的杀虫结果与分析

5.2.3氢化白果酸提纯物抑菌结果与分析

5.2.4氢化白果酸提纯物杀虫结果与分析

5.3本章小结

第六章结论

参考文献

致谢