重组人干扰素-α2b分离纯化的研究

摘要

干扰素是由不同细胞产生的可溶性糖蛋白,具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节功能。Ⅰ型干扰素中的干扰素-α因具有很强的抗病毒活性而被用于治疗慢性乙肝和丙肝感染。干扰素治疗中最大的缺点是具有极短的半衰期,这就降低了干扰素的药效和生物利用性。目前,提高干扰素半衰期的方法是采用聚乙二醇对干扰素-α2进行蛋白修饰。
　　由Bolder Biotechnology,nc生物技术公司构建的含有干扰素-α基因的质粒转化进大肠杆菌W3110,IPTG诱导后经SDS-PAGE分析,表达产物的分子量为19KDa左右,并且蛋白以不溶性的包涵体形式存在。
　　利用超声破碎对菌体细胞进行破碎可以提取包涵体,使用6mol/L盐酸胍对包涵体进行溶解变性,变性蛋白缓缓注入复性溶液稀释20倍,4℃静置48h后即可复性。
　　采用疏水相互作用层析分离重组人干扰素-α2b,去除干扰素样品中的二聚体,得到高纯度的干扰素用于进一步的研究。首先采用阳离子交换层析纯化复性重组人干扰素-α2b,去除了大部分的杂蛋白,然后采用疏水相互作用层析纯化重组人干扰素-α2b,去除复性过程中产生的错误折叠体和二聚体,并考察盐浓度、pH值、流速和洗脱液中尿素对疏水相互作用层析纯化效果的影响。最终确定硫酸铵初始浓度1.2mol/L、缓冲液pH值6.0、流速2.5mL/min、洗脱液中添加尿素浓度为2mol/L时疏水相互作用层析纯化效果最佳。最终得到的重组人干扰素-α2b非还原型SDS-PAGE电泳均呈单一条带。本文确定了疏水层析纯化重组人干扰素-α2b的最优条件,成功提取到具有高活性、高纯度的重组人干扰素-α2b纯品,样品回收率达到63.07％。

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第一章 文献综述

1.1 干扰素的研究背景

1.2 干扰素的临床应用

1.3 干扰素类上市产品

1.4 重组干扰素的表达

1.5 蛋白质的分离纯化

第二章 重组人干扰素-α2b在大肠杆菌中的表达

2.1 实验材料

2.2实验方法

2.3 实验结果

第三章 重组人干扰素-α2b的提取

3.1 实验材料

3.2 实验方法

3.3 实验结果

3.4小结

第四章 阳离子交换层析纯化重组人干扰素-α2b

4.1 实验材料

4.2 实验方法

4.3 实验结果

4.4 小结

第五章 疏水相互作用层析纯化重组人干扰素-α2b

5.1 实验材料

5.2 实验方法

5.3 实验结果

5.4 小结

第六章 羟基磷灰石层析纯化重组人干扰素-α2b

6.1 实验材料

6.2 实验方法

6.3 实验结果

第七章 总结与展望

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

致谢