诱导培养条件对甘草愈伤组织次生代谢产物多样性的影响

摘要

甘草资源的大量使用和长期过度开发使得世界上的野生甘草资源面临枯竭的危机,甘草植物细胞和组织培养作为一个培养生产中药植物药用成分或组分的技术,对大规模生产药用甘草次生代谢产物及其活性组分具有重要的意义。
　　本文的主要研究目的是采用化学分析和高效液相色谱(HPLC)相结合的方法评价典型愈伤组织诱导培养条件对甘草愈伤组织次生代谢产物多样性的影响,这些诱导培养条件包括甘草种属、外植体、光照条件、激素组成、激素浓度水平和基础培养基。首先采用不同诱导条件获得甘草愈伤组织,接着观察甘草愈伤组织的长势状况,发现外植体对甘草愈伤组织诱导率影响最大,采用胚轴和胚根为外植体诱导的甘草愈伤组织诱导率均为100％,采用子叶为外植体进行诱导的愈伤组织诱导率却只有30%~70%,其他的诱导条件对甘草愈伤组织的诱导率影响不明显;不同诱导条件除光照条件外对甘草愈伤组织生长状态影响相似,表现为黑暗条件下诱导的甘草愈伤组织颜色为黄色或淡黄色,光照条件下诱导的甘草愈伤组织大部分为绿色,愈伤组织生长状态良好。
　　愈伤组织生长稳定后,采用化学分析和HPLC相结合的方法评价不同诱导条件下获得的甘草愈伤组织次生代谢产物多样性的影响。采用单因素方差分析法评价不同诱导条件对甘草愈伤组织总酚及总黄酮含量的影响,结果显示甘草种属、外植体、光照条件、激素浓度水平和基础培养基对甘草愈伤组织中总黄酮的含量影响极其显著(P<0.01),激素组成只对甘草愈伤组织中总酚的含量具有极其显著的影响,对愈伤组织中总黄酮的含量却不具有显著的影响(P≥0.05)。其次,基于HPLC指纹图谱的差异度评价总酚、总黄酮含量有显著差异的愈伤组织。结果表明,诱导条件不同,愈伤组织的差异度也明显不同,差异最显著的一组样本,差异度值达到0.451,并且光照条件和激素组成对甘草愈伤组织次生代谢产物的多样性影响最大。

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第一章 文献综述

1.1甘草简介

1.2甘草的主要化学成分

1.3甘草资源现状及存在问题

1.4甘草组织培养

1.5化合物分析方法的研究进展

1.6课题研究意义

1.7课题研究内容及创新点

第二章 甘草愈伤组织细胞系的建立

2.1实验材料与方法

2.2结果与讨论

2.3小结

第三章 不同诱导培养条件对甘草愈伤组织总酚、总黄酮含量的影响

3.1实验材料与方法

3.2结果与讨论

3.3 小结

第四章 不同诱导培养条件对甘草愈伤组织次生代谢产物多样性的影响

4.1 实验材料与方法

4.2 结果与讨论

4.3小结

第五章 结论

5.1不同诱导培养条件对甘草愈伤组织诱导的影响

5.2不同诱导培养条件对甘草愈伤组织中总酚、总黄酮含量的影响

5.3 不同诱导培养条件对甘草愈伤组织次生代谢产物多样性的影响

5.4 考察不同条件下诱导培养的甘草愈伤组织与人工种植的甘草药材DF

参考文献

发表论文和科研情况说明

附录

致谢