Granzyme B基因转录调控机制的研究及perforin/granzyme B通路在实验性自身免疫性葡萄膜炎的致病机制中作用的研究

摘要

在人源granzyme B基因下游新发现的一个NF-κB结合位点调控该基因的转录表达已有的研究表明，granzyme B基因的表达对于NK细胞的自然杀伤活性和T细胞的功能来说都是非常重要的。然而granzyme B基因的转录调节机制还不是非常清楚。我们通过研究发现，NF-κB信号通路参与了granzyme B基因的转录调节。另外，我们在人源granzyme B基因下游发现了一个可以和NF-κB复合物结合的位点。其序列为——GGAGATTCCC。EMSA，荧光报告基因实验及染色体DNA免疫沉淀实验(ChIp)实验证明该位点无论是在NK细胞株——NK92还是在原代培养的NK细胞中都能发挥作用。我们的结果显示该位点在Jurkat T细胞中同样发挥功能。总而言之，我们在人源granzyme B基因下游发现了一个新的NF-κB的结合位点，该位点在granzyme B基因的转录调控中发挥重要作用。
　　 Granzyme B基因转录调控机制的研究及perforin/granzyme B通路在实验性自身免疫性葡萄膜炎的致病机制中作用的研究Perforin/granzyme B介导的细胞凋亡通路无论是在天然免疫系统还是在获得性免疫系统中都发挥非常重要的作用，尤其是在清除微生物和病毒感染以及对肿瘤细胞的免疫监视方面。已有的研究工作发现，perforin基因缺失的小鼠在病毒感染的清除、迟发性超敏反应、对肿瘤的抵抗等方面存在着重大缺陷。同样，来源于granzyme B基因缺失小鼠的自然杀伤细胞(NK)、淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)、及细胞毒性T淋巴细胞(CTL)在诱导靶细胞的DNA片断化及细胞凋亡能力上大为降低。由此可见，免疫细胞上表达的perforin及granzyme B分子对于其功能发挥及免疫系统的厄常运行具有不可或缺的影响。
　　 然而，尽管perforin/granzyme B介导的细胞凋亡通路的重要性已毋庸置疑，granzyme B基因的转录调控机制还不是非常清楚。在本论文中，我们发现NF-κB信号通路参与了granzyme B基因的转录调控机制，并在其下游DNA序列中找到了一个和NF-κB有相互结合作用的位点，其DNA序列为——GGAGATTCCC。EMSA实验、荧光报告基因实验及染色体DNA免疫沉淀实验证明该位点无论是在NK细胞株——NK92还是在原代培养的NK细胞中都能发挥作用。我们的结果显示该位点在Jurkat T细胞中同样发挥功能。总之，我们在人源granzyme B基因下游发现了一个新的NF-κB的结合位点，该位点在granzyme B基因的转录调控中发挥重要作用。
　　 近来，越来越多的研究报告提示细胞凋亡通路参与了自身免疫性疾病的致病机制。为此，我们也利用perforin墓冈缺失的小鼠(PKO)来研究perforin/granzymeB通路在实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)的致病机制中的作用。然而，出乎我们意料的是，PKO小鼠的EAU致病几率及平均得分均要明显高于对照组野生型小鼠。当从IRBP免疫过的小鼠中分离出淋巴细胞并用IRBP重刺激时，相比于对照组T细胞，来源于PKO小鼠的T细胞能分泌更多的细胞因子并表现出更强的增殖现象。当来源于PKO小鼠的CD4+T细胞在体外用anti-CD3抗体进行抗原非特异性刺激时，这些细胞同样表现出过度增殖的现象。而且相比于来源于正常小鼠的CD4+T细胞，来源于PKO小鼠的T细胞能更快地进行细胞分裂，在同样的时间内有更多的细胞分裂代数。这也从分子机制上解释了PKO小鼠更容易发生自身免疫性疾病的原因。

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声明

实验部分:第一章：在人源granzyme B基因下游新发现的一个NF-κB结合位点调控该基因的转录表达

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引言

材料和方法

结果和讨论

参考文献

实验部分:第二章：perforin/granzyme B通路在实验性自身免疫性葡萄膜炎的致病机制中的调节作用

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引言

材料和方法

结果和讨论

参考文献

综述一：NK细胞诱导靶细胞凋亡的机制

综述二：X染色体与人类肿瘤

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