杏鲍菇三萜类化合物提取纯化工艺及抑制肿瘤活性研究

摘要

杏鲍菇（Pleurotus eryngii）是一类品质优良的大型肉质伞菌，其味道鲜美，营养成分均衡，是近年来开发栽培成功的集食用和药用于一体的珍稀食用菌新品种。本论文以杏鲍菇的甲醇提取物为原料，相继用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，得到三种不同提取物。在前期模型鼠体内实验表明灌胃一定量的杏鲍菇三萜类提取物可显著抑制乳腺癌细胞增殖且存在剂量效应关系的基础上，本论文分离纯化三萜化合物含量较为丰富的乙酸乙酯提取物，鉴定三萜各组成单体，确定其分子结构，并比较各单体抑制肿瘤细胞增殖作用，解析其结构及功能基团对抑制肿瘤活性的影响，系统深入地研究了杏鲍菇三萜化合物的组成和构效关系，为杏鲍菇在功能性食品领域的开发应用提供了科学依据与理论基础。主要结论如下：
　　1.香草醛-冰醋酸显色比色法测定杏鲍菇三萜的最佳实验条件为：加入待测样品后，加热挥干溶剂，加入新配制的5％香草醛-冰醋酸溶液0.2mL、高氯酸溶液0.8mL，60℃条件下水浴15min后加入5mL冰醋酸，静置10min，于547nm处测定其吸光值，在此条件下进行的比色试验具有较高的显色灵敏度。
　　2.超声波辅助浸提杏鲍菇三萜的工艺参数为：提取时间30min，功率150W，料液比1:3。与甲醇浸提处理8h的实验组相比，超声波辅助浸提法使三萜提取率由1.02%提高至2.67%。
　　3.杏鲍菇不同溶剂的萃取物中三萜类化合物的含量不尽相同，其中乙酸乙酯萃取物中三萜类化合物含量较为丰富，达到131.47±0.73mg·g-1。利用硅胶柱层析法、凝胶色谱层析法和制备型薄层色谱法等分离纯化技术对乙酸乙酯层提取物进行分离纯化，并结合薄层色谱法对纯化的样品进行定性分析，获得3种三萜类化合物单体1-3。对其进行核磁共振检测和质谱分析，鉴定单体物质分别为：2，3，6，23-四羟基-12-烯-28-乌苏酸（化合物1），2，3，23-三羟基-12-烯-28-乌苏酸（化合物2）和羽扇豆醇（化合物3）。此三种物质均首次从杏鲍菇菌体中分离得到。
　　4.MTT结果显示，杏鲍菇乙酸乙酯提取物中分离纯化所得的3种三萜类化合物能显著抑制乳腺癌MCF-7细胞株和卵巢癌SK-OV-3细胞株的增殖，且在一定浓度范围内存在剂量效应关系。相同浓度条件下，3种化合物对MCF-7肿瘤细胞的抑制作用显著强于对SK-OV-3肿瘤细胞的抑制作用。对于同种肿瘤细胞，化合物的抑制肿瘤细胞增殖活性为化合物1>化合物2>化合物3。其对肿瘤细胞MCF-7的IC50值分别为15.71μM，48μM和66.89μM，对SK-OV-3细胞的IC50值分别为67.98μM，89.64μM和147.25μM。

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第一章 文献综述

1.1杏鲍菇的研究进展

1.2 三萜类化合物的研究现状

1.3三萜类化合物抗肿瘤作用机理

1.4本研究背景、目的及意义

1.5本研究主要内容及技术路线

第二章 杏鲍菇三萜类化合物提取工艺研究

2.1 试验材料

2.2试验方法

2.3 结果与分析

2.4 小结

第三章 杏鲍菇中三萜类化合物的分离纯化与结构鉴定

3.1试验材料

3.2 实验方法

3.3 结果与分析

3.4 小结

第四章 杏鲍菇三萜单体抗肿瘤活性研究

4.1 实验材料

4. 2实验方法

4.3 结果与分析

4.4小结

第五章 全文结论

参考文献

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