利用Smart cDNA-AFLP银染技术分离和克隆与花椰菜花色相关基因

摘要

利用Smart cDNA-AFLP(Amplified fragment length polymorphic)银染技术对花椰菜黄花(A0-3)和白花(A1-3)一对近等基因系的mRNA进行了分析.用8对选择性引物对这两个品系的cDNA进行了扩增,每对引物提供的谱带数在12-31之间,片段大小在50-600bp之间.其中2对引物的3条带在2个表达基因文库之间存在多态性,其中一条与白花品系共分离;另两条与黄花品系共分离.将与白花共分离的谱带W260和与黄花共分离的谱带Y310分离、扩增、克隆,并用Northern点杂交初步证明了它们分别为白花品系和黄花品系特有的.W260经测序后,通过Genbank进行同源性检测,发现它与矮牵牛胞质雄性不育株系3688的F1-ATPase的部分有92﹪的同源性.时一步的工作尚在进行.

目录

致谢

一前言

1关于花色的研究现状及花色相关基因的应用

1.1关于花色的研究

1.2花色相关基因的应用

2分离和克隆花色基因的技术

2.1功能克隆

2.2转座子标签技术(transposon tagging)

2.3差别筛选法

3.Smart PCR cDNA-AFLP银染技术的基本原理

4.本研究的内容和目的

二材料和方法

1实验材料

2实验方法

2.1总RNA的提取及处理

2.2cDNA的获得

2.3AFLP扩增和聚丙烯酰胺凝胶电泳

2.4聚丙烯酰胺凝胶的硝酸银染色

2.5AFLP差异片段的回收、扩增与克隆

2.6质粒DNA的提取

2.7DNA测序和核苷酸序列分析

2.8Northern杂交

结果

1.实验材料的总体RNA的检测

1.1总体RNA完整性的检测

1.2总体RNA浓度的测定及纯度的检测(表2)

2 Smart cDNA的合成和检测

3 Smart cDNA AFLP银染分析结果

4.特异片段的回收、扩增、克隆

5.Northern点杂交结果

6.序列分析

分析与讨论

1关于对花色的研究

1.1对花色研究的现实意义

1.2本研究对花椰菜花色研究的意义和结果分析

2.关于Smart cDNA-AFLP银染技术的优越性

五、结论

参考文献