乳腺癌转移相关基因的筛选及其临床应用研究

摘要

目的:乳腺癌的死亡率始终得不到有效控制,究其根本原因在于转移.许多研究表明:肿瘤的生物学行为是由基因改变决定的.该实验通过筛选、验证乳腺原位癌组织与乳腺转移癌组织的差异表达cDNA片段,以期发现新的与乳腺癌转移相关的差异表达基因,从分子基础上对乳腺癌的转移机理提供依据,同时为乳腺癌的早期预防、早期诊断提供新的基因标志,为早期治疗提供靶基因.方法:对用mRNA差异显示技术,以5组配对乳腺原位癌组织与乳腺转移癌组织为样本获得的差异表达的cDNA片段进行筛选、克隆、测序后,利用BLAST软件与GENBANK进行同源性比较,然后采用RT-PCR技术对所获得的基因进行验证.结论:RPS23和KLDBP在一定程度上在乳腺转移癌组织中表达上调,其具体机理和功能还需进行体内外实验和临床大样本量病例验证研究.

目录

摘要

前言

材料及方法

一、差异片段的克隆及测序

(一)实验仪器及主要试剂

(二)差异片段的连接，转化

(三)阳性克隆的筛选及质粒的提取

(四)酶切鉴定及测序

二、临床病例验证

(一)实验仪器及主要试剂

(二)病例选择，标本处理

(三)总RNA的提取

(四)DNase处理RNA样品

(五)RNA质量检测

(六)RT-PCR

结果

一、差异片段的选取

二、差异片段的克隆及筛选

三、质粒的酶切及差异片段的扩增

四、差异片段的测序及检索

五、RNA电泳结果

六、RT-PCR结果

分析与讨论

一、获得差异片段的意义

二、DD-PCR产生假阳性的原因及解决方法

结论

附图

参考文献

致谢

综述

一、BRCA1和BRCA2的研究进展

二、参考文献