雌激素对乳腺癌中骨形态发生蛋白—6的表达影响

摘要

目的:骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)属于转化生长因子(Transformation growth factor,TGF)-β超家族成员,其生物学功能不仅限于其诱导成骨活性,还涉及几乎全身所有系统的发育、生长及分化等.最近的研究发现在BMP家族中,BMP-6能够在多种肿瘤中异常表达,而且可能在肿瘤的发生和转移中发挥了作用.因为雌激素同乳腺癌的发生和转移关系密切,该实验主要通过研究雌激素对乳腺癌中BMP-6表达水平的影响,了解雌激素调控BMP-6方式,证实BMP-6在乳腺癌中的作用.方法:使用不同浓度的雌激素处理雌激素受体(ER)阳性的乳腺癌细胞MCF-7,72h后用半定量反转录PCR检测BMP-6的表达,并以雌激素受体阴性的乳腺癌细胞MDA-MB-231为对照.同时构建了人BMP-6启动子的荧光素酶报告基因(BMP-6 Promotor Luciferase Report gene,BMP6 PLR)质粒,并使用脂质体瞬时转染该质粒到MCF-7细胞中,通过检测荧光素酶的表达水平,检测雌激素对BMP-6启动子活性的影响.结果:ER阳性乳腺癌细胞MCF-7的BMP-6表达水平显著高于ER阴性的乳腺癌细胞MDA-MB-231(P<0.01).MCF-7细胞中,10<'-5>、10<'-7>mol/L的雌激素能够促进BMP-6表达提高(P<0.05).在MDA-MB-231细胞中,雌激素无此作用.使用构建的人BMP-6启动子的荧光素酶报告基因(BMP6 PLR)质粒转染MCF-7细胞,发现10<'-7>mol/L雌激素刺激对照不加雌激素刺激能够提高60﹪的BMP-6启动子活性(P=0.03).结论:在ER阳性的乳腺癌细胞中,BMP-6的表达水平受到雌激素的剂量相关的调控,雌激素对BMP-6的调控作用是通过作用于BMP-6启动子实现的.

目录

ABSTRACT

1前言

2实验材料

2.1实验原材料

2.2细胞系，菌株和载体

2.3引物设计

2.4分子生物学试剂盒

2.5生物酶

2.6主要化学试剂

2.7培养基及溶液

2.8主要仪器设备

3实验方案

4实验方法

4.1检测不同雌激素浓度对于乳腺癌细胞BMP-6表达的影响

4.2人BMP-6启动子DNA片段的克隆

4.3构建BMP-6启动子荧光素酶报告基因质粒pGL-3 BMP6 PLR

4.4构建BMP-6短片断启动子荧光素酶报告基因质粒pGL-3 BMP6S PLR

4.5细胞转染

4.6检测荧光素酶(1uciferase)的表达水平

4.7检测雌激素对于BMP-6启动子活性的影响

4.8统计学处理

5结果与分析

5.1半定量RT-PCR检测雌激素对于乳腺癌细胞BMP-6表达的影响

5.2克隆人BMP-6启动子片段

5.3 pGL-3 BMP6 PLR的构建及鉴定

5.4 pGL-3 BMP6S PLR的构建及鉴定

5.5 BMP-6启动子的活性验证

5.6雌激素对于BMP-6启动子的活性影响

6讨论

6.1细胞系的选择

6.2真核细胞基因启动子的确定

6.3转染

6.5雌激素及其受体同乳腺癌中BMP一6表达的关系

6.6 BMP-6与肿瘤的研究进展

7小结

8致谢

9参考文献

骨形态发生蛋白家族与肿瘤的研究进展

个人简历