表面分子印迹技术在生物分子色谱分离中的应用

摘要

本论文利用表面分子印迹技术水相中分别印迹了色氨酸和溶菌酶,考察了它们的色谱分离特性。具体来讲,本论文的工作包括以下三个方面： 一、综述了分子印迹技术的基本理论,分子印迹色谱固定相研究进展及蛋白质分子印迹的研究现状及发展前景。 二、水相中合成了一种新型的分子印迹聚合物,用来选择性识别色氨酸(Trp)。实验中采用表面分子印迹的方法,以功能化的硅球(F-silica-gel)为载体,制备了以L-Trp或者D-Trp为模板分子的分子印迹微球。首先用制备好的分子印迹微球对模板分子及其相似物进行了吸附实验。然后进一步将其装填色谱柱,用高效液相色谱考察其色谱分离能力。结果表明,印迹色谱柱在水相流动相的条件下不但成功地分离了色氨酸及其芳香族氨基酸相似物,而且还可以分离色氨酸的对映异构体。本方法为手性氨基酸分离和纯化提供了一条新思路。 三、采用表面活性自由基聚合法(SIP)在水相中成功制备了溶菌酶(Lysozyme)分子印迹微球(MIP beads)。通过上述方法得到的印迹微球有很好的孔分布并且没有溶液聚合副产物,与传统方法合成的不规则印迹微球相比有更好的特性。我们用红外光谱、元素分析、氮气吸附和扫描电镜对分子印迹微球进行了表征。同时还将溶菌酶分子印迹微球(Lysozyme-MIP beads)填装色谱柱,溶菌酶印迹柱能使模板蛋白(Lysozyme)与其竞争蛋白牛血红白蛋白(BHb)、牛血清白蛋白(BSA)、卵清白蛋白(Ovalbumin)或细胞色素C(Cyt C)得到分离。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章前言

第一节分子印迹技术概述

1.1.1分子印迹技术的发展概况

1.1.2分子印迹聚合物制备过程

第二节分子印迹色谱固定相研究进展

1.2.1 沉淀聚合法

1.2.2 原位聚合法（整体柱法）

1.2.3 悬浮聚合法

1.2.4 多步溶胀聚合法

1.2.5 表面聚合法

1.2.6 溶胶凝胶聚合法

1.2.7 展望

第三节 蛋白质分子印迹

1.3.1 蛋白质分子印迹概述

1.3.2生物大分子印迹聚合物的制备

1.3.3 生物大分子印迹技术存在的问题和前景

参考文献

第二章 以键合β-环糊精和丙烯酰胺为功能单体表面印迹色氨酸及其在水相识别中的应用

2.1 引言

2.2实验部分

2.2.1 仪器

2.2.2 试剂

2.2.3合成功能化硅胶

2.2.4分子印迹聚合物的合成

2.2.5客体吸附实验

2.2.6高效液相色谱分离实验

2.3结果与讨论

2.3.1分子印迹聚合物的表征

2.3.2分子印迹聚合物的吸附性质

2.3.3 色谱分析

2.4结论

参考文献

第三章 光接枝表面修饰聚苯乙烯微球制备分子印迹聚合物色谱分离蛋白质

3.1 引言

3.2实验部分

3.2.1 实验材料

3.2.2分子印迹微球的制备

3.2.3聚合物的性质表征

3.3结果与讨论

3.3.1 MCP球修饰iniferter的时间的影响

3.3.2特性表征

3.3.3色谱分析

3.3.4 Lysozyme-MIP柱的重现性

3.4 结论

参考文献

个人简历及在学期间发表的学术论文与研究成果

致谢