天然产物中EV71-3C蛋白酶抑制剂的筛选

摘要

EV71-3C蛋白酶在病毒蛋白加工过程中，水解除了VP1、2A、VP2和VP4之外的所有多聚蛋白;还切割许多调控因子，如转录激活因子p53和TATA-box结合蛋白(TBP)等;所以，EV71-3C蛋白酶有望作为蛋白靶点进行药物开发。
　　本文以EV71-3C蛋白酶为靶点，运用高通量筛选方法从天然产物中筛选其抑制剂。首先，对现有天然产物库和中药材及其饮片的初步提取分离组分进行筛选，选出抑制效果较好的药材。经过初步筛选，得到5种活性较好的药材:穿心莲、鱼腥草、苏叶、黄柏、荆芥。经95％乙醇提取后，利用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、大孔树脂色谱、聚酰胺色谱、Combiflash快速分离色谱及高效液相色谱法、重结晶等技术对实验室储备的中草药浸膏和中药饮片进行提取、分离、纯化，获得标准组分（成分约为10-20种）或单体增补到天然产物库中。然后基于3C蛋白酶的体外高通量酶活筛选体系进行活性检测。并且借助1H-NMR、13C-NMR、MS、DEPT和2D-NMR等波谱法鉴定分离得到的化合物结构。
　　从这5种药材中，共分离得到35个单体化合物，鉴定了其中20个化合物的结构，分别为:从穿心莲中分离出穿心莲内酯、油酸、14-去氧-11，12-二去氢穿心莲内酯、β-谷甾醇&5-羟基-7，8，2'，6'-四甲氧基黄酮、5-羟基-7，8-二甲氧基黄酮、5-羟基-7，8-二甲氧基二氢黄酮、棕榈酸等;从鱼腥草中分离出槲皮苷、β-谷甾醇、金丝桃苷、月桂酸等;从苏叶中分离出异虎耳草素、熊果酸（又名乌索酸）、紫苏酮、β-谷甾醇等;从黄柏中分离出黄柏酮和黄柏内酯;从荆芥中分离出β-谷甾醇&豆甾醇等。

目录

声明

摘要

第一章 引言

第一节 手足口病及肠道病毒的简介

第二节 肠道病毒71型及其危害

第三节 3C蛋白酶靶点的选择

第四节 国内外研究现状

1．4．1 生物医药抗EV-71病毒的研究现状

1．4．2 化药抗EV-71病毒的研究现状

1．4．3 中药抗EV71病毒的研究现状

1．4．4 其他类

第五节 选题依据

第二章 实验设计方案

第一节 天然产物组分库的扩建

2．1．1 天然产物组分库的扩建

第二节 中药材的提取分离及其酶活检测

2．2．1 中药材的系统提取分离纯化

2．2．2．酶活检测原理及方法

第三章 实验部分

第一节 实验材料、仪器和试剂

3．1．1 仪器和试剂

3．1．2 实验材料

第二节 穿心莲浸膏的分离

3．2．1 穿心莲背景介绍

3．2．2 穿心莲浸膏的分离纯化

3．2．3 结果与讨论

第三节 鱼腥草浸膏活性跟踪分离

3．3．1 鱼腥草背景介绍

3．3．2 鱼腥草浸膏的分离

3．3．3 结果与讨论

第四节 苏叶浸膏活性跟踪分离

3．4．1 苏叶背景介绍

3．4．2 苏叶浸膏的分离纯化

3．4．3 结果与讨论

第五节 黄柏浸膏活性跟踪分离

3．5．1 黄柏背景介绍

3．5．2 黄柏浸膏的分离

3．5．3 结果与讨论

第六节 荆芥浸膏活性跟踪分离

3．6．1 荆芥背景介绍

3．6．2 荆芥浸膏的分离

3．6．3 结果与讨论

第四章 结论

参考文献

致谢

附录

个人简历