多肽小分子水凝胶在生物医学领域的应用

摘要

通过非共价键自组装形成的多肽水凝胶由于其独特的优点：合成简单，容易功能化且功能单元明确，生物相容性好，低免疫原性和低毒性，固有的生物降解性以及对外界环境的快速刺激响应性等，经过近二十年的发展，多肽水凝胶已经在细胞三维培养，细胞治疗，药物控释，疾病诊断和治疗，增强机体免疫和再生医学等方面展示了很大的应用前景。并且有些短肽水凝胶在近几年已经逐步商品化。虽然多种多样的水凝胶被设计合成，但是其实际应用尤其是在生物医学的应用刚刚处于起步阶段。在本论文，我们把多肽水凝胶与癌症治疗结合起来，旨在发展针对化疗药物，细胞治疗以及免疫治疗（抗体蛋白）的新型水凝胶载体系统。本论文的主要内容可以分为如下四个部分：
　　1：我们设计合成几种基于抗癌药物紫杉醇和短肽/氨基酸的小分子水凝胶，其合成简单易行并且形成的水凝胶有很高的包载率。通过控制氨基酸的种类以及多肽链的长度等可以精确控制药物的包载率。我们发现即使紫杉醇连接上一个单独的亲水氨基酸，形成的分子也能形成非常稳定的水凝胶，并且具有和紫杉醇相同的药效。同时我们发展了一种主要由紫杉醇自己所组成的水凝胶，动物实验证实该水凝胶能直接注射进实体瘤阻止肿瘤的生长和迁移。血液中低浓度的紫杉醇和高的抗癌活性表明我们的紫杉醇水凝胶在化疗中有很大的应用前景。这种药物既作为载体又作为运载货物的自我传输体系有很大的希望应用于临床。2：我们设计一种新型靶向细胞线粒体的自组装短肽分子，提出细胞器成胶杀死癌细胞的新策略。我们利用癌症细胞微环境与正常细胞微环境的不同：癌细胞过量表达某些酶，以及癌细胞的还原环境等，实现该分子在癌症细胞内可以组装形成纳米纤维，从而控制癌细胞的命运，但是对正常细胞没有杀伤作用。更为重要的是，靶向线粒体基团的加入，可以利用线粒体周围粘性比正常细胞高的特点，大大降低了自组装分子的最低成胶浓度，实现在线粒体成胶，极大的降低了化合物使用量。
　　3：利用细胞膜表面的特性，我们发现含有D构型氨基酸的自组装多肽分子可以特异性富集在细胞膜表面，而由L构型氨基酸组成的自组装分子没有这种现象。同时我们证明利用这种性质可以对细胞膜进行表面工程化，在细胞膜上面引入特定的多肽，蛋白等功能性分子。这种对细胞膜表面工程化的新策略可以很方便的应用在细胞治疗领域；我们接着根据蛋白质多肽特异结合的性质，设计一种蛋白质表面诱导的自组装体系，并且成功把远红外/近红外的环境响应型荧光分子引入到该体系中，实现了体外和体内检测蛋白和多肽相互作用。这种蛋白表面诱导自组装促使荧光分子变亮的策略在检测（多聚）蛋白或者（多聚）蛋白-多肽之间的相互作用中，例如，阿兹海默症和朊病毒疾病等方面将会有很大的应用前景。
　　4：我们提出一种通用的用来制备由多肽与一种或者多种蛋白共组装形成的纳米纤维水凝胶的方法。我们证明这种策略不仅在体外可以很好地保持蛋白质的稳定性和生物活性，而且实验证明它可以有效的细胞内转染蛋白和体外增强酶的级联反应。另一方面，我们发现多肽与蛋白质共组装形成的纳米纤维水凝胶能很强的增加动物免疫效应，它能同时激活体液免液和细胞免疫应答。进一步实验我们发现共组装的纳米纤维水凝胶可以通过增加 DC细胞对蛋白质摄取，对DC细胞活化以及促进生发中心形成等促进疫苗的产生。我们的设计对于蛋白质的传输，活性蛋白体内功能和稳定性的维持以及作为疫苗佐剂等方面提供了一种新策略，同时也拓展了小分子水凝胶在生物医学领域的应用。

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第一章 前言

第一节 选题背景和研究意义

第二节 本课题的选题依据和意义

第三节 本论文的的主要研究内容

参考文献

第二章 小分子水凝胶在癌症治疗中的应用

第一节 紫杉醇-氨基酸/短肽连接物形成的小分子水凝胶研究

第二节 无需载体的紫杉醇水凝胶的制备及其生物活性研究

第三节 高分子添加物对紫杉醇水凝胶的影响及其体内抗肿瘤活性研究

第四节 靶向线粒体细胞内成胶控制癌细胞命运

第三章 表面诱导自组装在细胞表面工程化和检测中的应用

第一节 自组装的D构型短肽水凝胶在细胞表面工程化的应用

第二节 蛋白质表面诱导自组装用于检测蛋白-多肽相互作用

第四章 短肽与蛋白质共组装的水凝胶应用于蛋白质传输

第一节 多肽和蛋白质共组装形成的纳米纤维水凝胶用于细胞内蛋白传输

第二节 多肽与蛋白质/抗原共组装作为疫苗佐剂的应用

第五章 论文总结和未来挑战

参考文献

致谢

附录

附录A 主要仪器设备

附录B 常规试剂

附录C 常规实验方法

个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果