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摘要
Abstract
摘要 I
2.2.9 电生理实验内液外液的配置 16
致谢 74
第一章 引言
1.1.1 神经发生及神经性疾病的影响
1.1.2 Pax6基因在神经谱系中的作用
第二节 神经诱导
1.2.1 神经祖细胞的特性
1.2.2 小鼠神经祖细胞(mNPCs)的分化
1.3.1 基因编辑技术简介
1.3.2 利用基因编辑技术构建基因报告系统
第四节 实验设计
第二章 材料和方法
2.1.1 实验细胞和动物来源
2.1.2 主要试剂
2.1.3 主要实验仪器和耗材
2.2.1 成纤维细胞(MEF)培养基
2.2.2 小鼠胚胎干细胞(mESCs)培养基
2.2.3 小鼠拟胚体细胞（EB）培养基
2.2.4 体外定向诱导神经分化培养基
2.2.5 神经祖细胞（NPCs）培养基
2.2.6 体外定向诱导少突细胞和神经元培养基
2.2.7 体外定向诱导星型胶质细胞培养基
2.2.8 细胞冻存液的配置
2.2.9 电生理实验内液外液的配置
2.2.10 磷酸盐缓冲液（PBS）的配置
第三节 实验方法
2.3.1 饲养层细胞的制备
2.3.2 小鼠胚胎干细胞系的建系
2.3.3 Pax6-GFP质粒构建
2.3.4 Pax6-GFP胚胎干细胞建系
2.3.5 定向神经祖细胞分化
2.3.6 免疫荧光检测
2.3.7 流式细胞仪分选
2.3.8 神经祖细胞蛋白表达检测
2.3.9 体内神经谱系分化检测
2.3.10 下游神经元分化检测
2.3.11 神经元功能性检测
2.3.12 统计学分析
第三章 实验结果
第一节 利用CRISPR/Cas9技术成功构建Pax6-GFP报告系统
第二节 潜在脱靶位点检测验证了两条sgRNA没有出现脱靶现象
第三节 利用Pax6-GFP报告系统高效获得mNPCs
第四节 利用Pax6-GFP系统获得的mNPCs具有完整的功能特性
第五节 在mESCs培养基中添加小分子抑制剂后可提高mNPCs的分化效率
第四章 讨论
参考文献
个人简历
附录 A（研究论文）
致谢
南开大学;
