多元络合物荧光探针在生物分析中的研究及应用

摘要

人血清白蛋白是血液中的主要蛋白之一，起着储存和运输药物及其它外源性物质的作用。对蛋白质溶液构象、蛋白质与小分子相互作用等结构和功能的研究不仅有助于在分子层次水平上认识小分子与蛋白质的作用机理和规律，而且有助于认识药物药效作用，为药物分子设计、筛选及新药开发提供有益的启发与重要指导。 本论文基于开展蛋白质与小分子配体相互作用的重要意义及国内外研究趋势，在前人工作的基础上，根据本实验室的具体条件，综合利用荧光光谱、紫外可见吸收光谱、傅里叶变换红外光谱（FTIR）方法，从以下几方面进行了创新性研究： （1）研究了模拟生理条件下，酸性铬兰K（ACBK）、α—萘乙酸（NAA）、骨螺紫（Mx）及其铜络合物、酞紫（PP）及其锌络合物与人血清白蛋白（HSA）的相互作用。 （2）利用荧光猝灭方法研究了酸性铬兰K、骨螺紫及其铜络合物、酞紫及其锌络合物与HSA内源荧光猝灭类型及猝灭常数，通过计算热力学参数讨论了分子相互作用的驱动力类型，利用非辐射能量转移理论，计算了配体在血清蛋白分子上的结合空间距离和分子间能量转移效率。利用同步荧光及FTIR技术考察了小分子对HSA构象的影响，获得了作用前后HSA二级结构含量的变化值。 （3）利用荧光增强公式获得了α—萘乙酸与HSA的结合常数及结合位点数，结合同步荧光光谱及FTIR对作用前后HSA的结构变化的研究，探讨了二者的作用机理。 （4）分析了多元络合物体系中金属离子的作用机理。

目录

文摘

英文文摘

声明

1 绪论

1.1 研究意义

1.2 血清白蛋白的基本信息

1.2.1稳定蛋白质分子结构的作用力

1.2.2蛋白质的分子结构

1.2.3.人血清白蛋白的结构特点

1.3 血清蛋白体系相互作用的研究方法

1.3.1紫外可见吸收光谱法

1.3.2荧光光谱法

1.3.3傅立叶变换红外光谱法(FT-IR)

1.3.4其他研究方法

1.4 血清蛋白体系相互作用的研究现状

1.4.1蛋白质与配体的结合常数和结合位点数

1.4.2蛋白质与配体结合部位的确定

1.4.3蛋白质构象的变化及二级结构含量的测定

1.5 不同探针类型

1.5.1药物

1.5.2有机染料

1.5.3有机毒性物质

1.5.4表面活性剂

1.5.5金属离子

1.5.6多元络合物

1.6 课题来源

1.7 本论文的选题思路

2人血清白蛋白与酸性铬兰K相互作用的研究

2.1 前言

2.2 实验内容及方法

2.2.1仪器与试剂

2.2.2红外光谱的采集及谱图处理

2.2.3荧光光谱及紫外光谱测定

2.3 结果与讨论

2.3.1荧光猝灭光谱

2.3.2猝灭机理

2.3.3人血清白蛋白的二级结构变化

2.4 小结

3人血清白蛋白与α-萘乙酸荧光增强效应的研究

3.1 前言

3.2 实验内容及方法

3.2.1仪器与试剂

3.2.2红外光谱的采集及谱图处理

3.2.3荧光光谱及紫外光谱测定

3.3 结果与讨论

3.3.1荧光增强光谱

3.3.2表观结合常数及结合位点数

3.3.3结合距离

3.3.4酸度影响

3.3.5人血清白蛋白的构象变化

3.3.6人血清白蛋白的二级结构变化

3.4 小结

4骨螺紫及其铜络合物与人血清白蛋白相互作用的光谱学研究

4.1 前言

4.2. 实验内容及方法

4.2.1仪器与试剂

4.2.2红外光谱的采集及谱图处理

4.2.3荧光光谱及同步荧光光谱测定

4.2.4紫外光谱测定

4.3 结果与讨论

4.3.1荧光猝灭光谱

4.3.2猝灭机理

4.3.3人血清白蛋白的构象变化

4.3.4人血清白蛋白的二级结构变化

4.4 小结

5人血清白蛋白与酞紫及其锌络合物相互作用的光谱学研究

5.1 前言

5.2 实验内容及方法

5.2.1仪器与试剂

5.2.2荧光光谱及同步荧光光谱测定

5.2.3紫外光谱测定

5.3 结果与讨论

5.3.1荧光猝灭光谱

5.3.2猝灭机理

5.3.3作用力推测

5.3.4人血清白蛋白的构象变化

5.4 小结

结 论

致 谢

参考文献

攻读硕士学位期间发表的论文及科研成果