藏蒲公英多糖提取工艺及其纳米制剂的免疫试验初步研究

摘要

本论文探讨了藏蒲公英多糖的最佳微波提取工艺。通过用L9(34)正交试验设计方案，考察了提取时间(min)、微波功率(W)、料水比3种因素对藏蒲公英多糖得率的影响，得出最佳提取工艺条件为:料水比1∶30，微波功率400W，提取时间20min，在此工艺条件下提取的藏蒲公英多糖平均得率为9.74％，与传统热水提取法所得多糖得率7.46％相比较，多糖得率提高了2.28％，经苯酚-硫酸法测定其纯度为74.3％。采用微波提取藏蒲公英多糖，提取率较高，且能大大的缩短提取时间，操作方便，是较为理想的多糖提取方法。
　　 藏蒲公英多糖纳米乳采用本课题组的方法制备，配料比为Tween80∶Span80∶液体石蜡∶乙醇∶藏蒲公英多糖水溶液=3∶1∶2∶1∶3(v∶v)，制备的纳米乳为淡黄色透明液体，流动性较好。该纳米乳容易被油溶性染料苏丹红染成红色，并且经高速离心仍保持澄清透明态，无絮凝和分层现象发生，证明制备的藏蒲公英多糖纳米乳是W/O型纳米乳。透射电镜下观察纳米乳液滴大多呈圆球形;纳米粒度仪测得本纳米乳平均粒径为63.4nm，PDI为0.198，粒径分布范围窄;pH值6.48，粘度3.60s，经稳定性验没有出现分层和絮凝现象。
　　 通过试验观察正常的健康小鼠分别在服用生理盐水、藏蒲公英多糖水溶液以及藏蒲公英多糖纳米乳的情况下，小鼠的脾脏、胸腺等免疫器官指数、腹腔巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数、ANAE阳性淋巴细胞百分率等指标的变化情况。结果显示:藏蒲公英多糖纳米乳能使小鼠免疫器官指数升高，促进免疫器官生长发育，刺激机体体液免疫、细胞免疫和非特异性免疫，增强小鼠免疫力。
　　 该研究结果可作为蒲公英多糖药理作用的补充，也为今后藏蒲公英在西藏养牛业中的进一步应用提供了理论基础。

目录

声明

摘要

第1章 绪论

1．1 课题研究来源及立题依据

1．2 本课题研究主要内容

1．3 蒲公英研究概述

1．3．1 蒲公英简介

1．3．2 藏蒲公英简介

1．3．3 蒲公英的化学成分

1．4 蒲公英多糖研究进展

1．4．1 蒲公英多糖的药理学研究进展

1．4．2 蒲公英多糖的提取分离研究进展

1．5 纳米乳概述

1．5．1 纳米乳概念

1．5．2 纳米乳在药剂学中的应用及其特点

1．5．3 纳米乳的组成及处方确定原则

1．5．4 纳米乳的结构类型及鉴别

1．5．5 纳米乳的制备及其质量评价方法

第2章 藏蒲公英多糖的微波提取工艺研究

2．1 材料、试剂及仪器

2．1．1 材料与试剂

2．1．2 仪器

2．2 试验方法

2．2．1 藏蒲公英多糖的提取、分离与纯化

2．2．2 藏蒲公英多糖纯度的测定

2．3 结果与分析

2．3．1 微波提取藏蒲公英多糖正交试验方案及其多糖得率计算结果

2．3．2 验证试验及其结果

2．3．3 藏蒲公英多糖纯度测定试验结果

2．4 结论

第3章 藏蒲公英多糖纳米乳的制备及其性质研究

3．1 试验试剂及仪器设备

3．1．1 试验试剂

3．1．2 试验仪器设备

3．2 试验方法

3．2．1 藏蒲公英多糖纳米乳处方的筛选方法及制备

3．2．2 藏蒲公英多糖纳米乳性质及稳定性考察

3．3 藏蒲公英多糖纳米乳性质及稳定性考察结果

3．3．1 纳米乳剂外观和类型鉴别结果

3．3．2 纳米乳剂的粘度、形态及粒径测定结果

3．3．3 纳米乳剂的稳定性考察结果

3．4 结果与讨论

第4章 藏蒲公英多糖纳米乳对小鼠免疫机能的影响研究

4．1 试验材料及仪器设备

4．1．1 试验材料与试剂

4．1．2 主要仪器及设备

4．2 试验方法

4．2．1 试验动物分组与处理

4．2．2 脾脏指数和胸腺指数的测定

4．2．3 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能测定

4．2．4 小鼠外周血ANAE阳性细胞率的测定

4．3 数据处理

4．4 结果与分析

4．4．1 免疫器官肉眼观察结果

4．4．2 藏蒲公英多糖纳米乳对小鼠脾脏指数的影响

4．4．3 藏蒲公英多糖纳米乳对小鼠胸腺指数的影响

4．4．4 藏蒲公英多糖纳米乳对小鼠外周血ANAE阳性细胞率的影晌

4．4．5 藏蒲公英多糖纳米乳对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响

4．5 讨论

结论

致谢

参考文献

附录

攻读硕士学位期间发表的学术论文及科研成果