栀子苷/黄芩苷心血管作用及应用于血管支架药物涂层研究

摘要

机体是一个复杂的网络系统，疾病的发生与发展牵涉到系统生物的诸多环节。许多中药中含有的活性组分可通过作用于多个靶点而共同发挥治疗作用，达到系统生物学范畴的多靶点药物治疗作用。经皮冠状动脉介入(PCI)后发生的支架内再狭窄是当前国内外心血管治疗领域的一个主要难题。理想的药物洗脱支架，除满足载药涂层释放行为平稳、可控外，更重要的是其涂层中负载的药物应该选择性地抑制血管平滑肌，但是对血管内皮细胞没有作用或者有促进其增殖作用，同时期望具有抗凝血作用。本课题通过研究(1)中药组分栀子苷的抗血栓作用及血管相关细胞如内皮细胞(EC)、平滑肌细胞(SMC)、内皮祖细胞(EPC)、骨髓间充质干细胞(MSC)的调节作用（如增殖、迁移、粘附等）;(2)黄芩苷及栀子苷/黄芩苷配伍对内皮及平滑肌细胞的影响;(3)栀子苷、黄芩苷两种单体及其配伍的血管支架载药薄膜的制备工艺及评价研究。得到主要结论如下。
　　(1)栀子苷抗血栓作用研究发现:栀子苷能减少动静脉血栓模型的血栓干湿重，抑制FeCl3诱导的大鼠颈动脉血栓形成;可以降低全血粘度、抑制内皮素释放、降低血栓素含量、提高前列腺素F1α含量，抑制二磷酸腺苷(ADP)诱导的血小板聚集，而这些都与血小板有关，说明栀子苷可能通过抑制血小板聚集而起到其抗血栓形成的作用。
　　(2)栀子苷、黄芩苷及其配伍细胞作用研究发现:栀子苷可促进EC、SMC、EPC、 EPC的增殖、迁移、粘附;黄芩苷(50mg/L)为内皮细胞增殖和平滑肌抑制双重作用的最佳浓度;栀子苷、黄芩苷配伍(1∶2)具有保护EC、抑制SMC增生的双相调节作用。
　　(3) PLGA负载栀子苷、黄芩苷及其配伍的药物薄膜载体材料筛选、工艺、释放行为及体外评价研究结果表明:PLGA(LA∶GA=60∶40)的载药薄膜降解行为较好，载药薄膜较光滑;确定了栀子苷、黄芩苷及其配伍的载药量为10％，栀子苷(12.5mg/L)与黄芩苷(50mg/L)配伍比例为1∶2的药物涂层一个月内的药物累积释放量达到90％，具有促进内皮细胞、抑制平滑肌细胞的双相调节作用，同时可降低血小板数量且显著延长血浆凝血酶时间(TT)和活化部分凝血活酶时间(APTT)，可以作为药物洗脱血管支架的药物涂层。

目录

声明

摘要

第一章 绪论

1．1 引言

1．2 中医“整体观念”

1．3 中药对心血管系统作用

1．3．1 单味中药对血管作用

1．3．2 栀子苷对心血管系统作用

1．3．3 黄芩苷对心血管系统作用

1．4 心血管疾病的介入治疗和药物洗脱血管支架发展

1．4．1 经皮冠脉介入治疗

1．4．2 药物洗脱血管支架发展

1．5 药物洗脱血管支架载药

1．5．1 雷帕霉素及其衍生物

1．5．2 中药单体抗平滑肌细胞增生药物

1．6 药物洗脱血管支架载体材料

1．7 支架血栓症的防治

1．7．1 PCI术前准备

1．7．2 PCI围手术期

1．7．3 PCI术后药物治疗

1．7．4 支架血栓症的治疗

1．8 本课题目的和意义

1．9 本课题的主要研究内容和技术路线

1．9．1 技术路线

1．9．2 研究内容

第二章 栀子苷抗血栓作用的研究

2．1 引言

2．2 材料

2．2．1 仪器

2．2．2 试剂

2．2．3 实验动物

2．3 方法

2．3．1 动静脉旁路血栓模型对体内血栓形成的影响

2．3．2 三氯化铁致颈动脉血栓形成的影响

2．3．3 大鼠血瘀模型致血栓形成的影响

2．3．4 栀子苷对体内血小板的影晌

2．4 统计方法

2．5 结果

2．5．1 对动静脉旁路血栓模型的影响

2．5．2 对三氯化铁模型的影响

2．5．3 栀子苷对血瘀模型的影响

2．5．4 栀子苷对ADP诱导的血小板聚集的影响

2．6 讨论

2．7 本章小结

第三章 栀子苷及其代谢产物京尼平的药代动力学研究

3．1 引言

3．2 材料

3．2．1 仪器

3．2．2 试剂

3．2．3 动物

3．3 方法

3．3．1 栀子苷方法学的建立

3．3．2 京尼平方法学的建立

3．3．3 栀子苷血浆样品处理方法

3．3．4 京尼平血浆样品的处理方法

3．3．5 给药及血浆样品采集

3．4 统计学分析

3．5 结果

3．5．1 栀子苷方法学的建立

3．5．2 京尼平方法学的建立

3．5．3 栀子苷药代动力学结果分析

3．5．4 京尼平药代动力学结果分析

3．6 讨论

3．7 本章小结

第四章 栀子苷／黄芩苷对血管相关细胞的影响

4．1 前言

4．2 材料

4．2．1 仪器

4．2．2 试剂

4．2．3 实验动物

4．2．4 细胞株

4．3 方法

4．3．1 EPC的分离、培养

4．3．2 实验分组

4．3．3 EPC增殖能力检测

4．3．4 EPC粘附能力检测

4．3．5 EPC／MSC迂移能力检测

4．3．6 EC／SMC的培养

4．3．7 EC／SMC的冻存与复苏

4．3．8 栀子苷和黄芩苷对EC／SMC作用24h的影响

4．3．9 过氧化氢(H2O2)损伤EC 12h造模的浓度筛选

4．3．10 栀子苷和黄芩苷对H2O2损伤EC作用24h的最佳浓度筛选

4．3．11 不同比例栀子苷和黄芩苷配伍对H202损伤EC及SMC作用12h／24h的影响

4．3．12 栀子苷／黄芩苷配伍对增殖能力检测

4．4 统计学分析

4．5 结果

4．5．1 栀子苷对EPC增殖能力的影响

4．5．2 栀子苷对EPC粘附能力的影响

4．5．3 栀子苷对EPC迁移能力的影响

4．5．4 栀子苷对MSC增殖能力的影响

4．5．5 栀子苷对MSC粘附能力的影响

4．5．6 栀子苷对MSC迁移能力的影响

4．5．7 栀子苷和黄芩苷对EC作用24h的影晌

4．5．8 过氧化氢(H2O2)损伤EC 4h造模的剂量筛选

4．5．9 栀子苷和黄芩苷对H2O2损伤EC保护作用的最佳浓度筛选

4．5．10 栀子苷和黄芩苷配伍对H2O2损伤EC保护作用的最佳配比筛选

4．5．11 栀子苷和黄芩苷对SMC作用24h的影响

4．5．12 不同比例栀子苷和黄芩苷配伍对SMC作用12h／24h的影晌

4．6 讨论

4．7 本章小结

第五章 药物洗脱血管支架用栀子苷／黄芩苷及其配伍载药薄膜的制备及物理表征

5．1 引言

5．2．1 仪器

5．2．2 试剂

5．3 方法

5．3．1 基团贡献法筛选载体材料

5．3．2 部分溶解度参数的计算

5．3．3 药物与载体材料的结构式及基团

5．3．4 载体材料的降解行为

5．3．5 栀子苷载药薄膜的制备

5．3．6 黄芩苷载药薄膜的制备

5．3．7 载栀子苷-黄芩苷配伍PLGA薄膜的制备

5．3．8 膜厚度的测定

5．3．9 SEM表面形貌分析

5．3．10 XRD结构分析

5．3．11 FTIR表面结构分析

5．3．12 DSC行为分析

5．3．13 TG行为分析

5．3．14 溶剂残留量分析

5．4 结果

5．4．1 溶解度参数的计算结果与比较

5．4．2 高分子载体材料的降解行为

5．4．3 栀子苷、黄芩苷及其配伍的载药膜厚度

5．4．4 PLGA空白膜和PLGA载药(栀子苷、黄芩苷及其配伍)膜的表面形貌(SEM)

5．4．5 载药薄膜XRD射线

5．4．6 载药薄膜FTIR表面结构分析

5．4．7 栀子苷载药薄膜DSC表征

5．4．8 栀子苷载药薄膜的热力学(TG)行为

5．4．9 栀子苷／黄芩苷配伍载药薄膜氯仿残留量

5．5 讨论

5．6 本章小结

第六章 药物涂层的体外药物释放行为研究

6．1 引言

6．2 材料

6．2．1 仪器

6．2．2 试剂

6．3 方法

6．3．1 栀子苷溶液方法学考察

6．3．2 黄芩苷溶液方法学考察

6．3．3 栀子苷载药薄膜的制备

6．3．4 黄芩苷载药薄膜的制备

6．3．5 栀子苷-黄芩苷配伍载药薄膜的制备

6．3．6 药物释放行为

6．4 结果

6．4．1 栀子苷方法学结果

6．4．2 黄芩苷溶液相测定方法结果

6．4．3 栀子苷释放行为

6．4．4 黄芩苷释放行为

6．4．5 栀子苷-黄芩苷配伍载药膜药物释放行为

6．4．6 栀子苷-黄芩苷配伍载药膜药物释放过程DSC结果

6．5 讨论

6．6 本章小结

第七章 栀子苷和黄芩苷及其配伍载药薄膜细胞及血液相容性研究

7．1 引言

7．2 材料

7．2．1 仪器

7．2．2 试剂

7．2．3 细胞株

7．3 方法

7．3．1 内皮细胞及平滑肌细胞的培养

7．3．2 内皮细胞及平滑肌细胞的冻存与复苏

7．3．3 细胞计数

7．3．4 栀子苷载药薄膜对EC作用1天和3天的影响

7．3．5 黄芩苷磷脂复合物薄膜对EC作用1天和3天的影响

7．3．6 增殖能力检测

7．3．7 DAPI细胞核染色实验

7．3．8 凝血四项及血常规的测定方法

7．4 统计学分析

7．5 结果

7．5．1 栀子苷载药膜对EC及SMC作用1天和3天的影响

7．5．2 黄芩苷复合物薄膜对EC及SMC作用1天和3天的影响

7．5．3 栀子苷-黄芩苷配伍载药薄膜对EC作用

7．5．4 栀子苷-黄芩苷配伍载药薄膜对SMC作用

7．5．5 栀子苷-黄芩苷配伍载药涂层工艺探索

7．5．6 栀子苷-黄芩苷配伍载药薄膜对血小板数量的影响

7．5．6 栀子苷-黄芩苷配伍载药薄膜对正常血液凝血四项影响

7．6 讨论

7．7 本章小结

全文小结

结论与展望

致谢

参考文献

简写附录

攻读博士学位期间发表的论文及科研成果