峨参石油醚部位与5-FU联用对结肠癌立体多细胞球及裸鼠移植瘤的影响

摘要

目的:本次实验研究首先在细胞层面上，探讨混合物峨参石油醚部位与5-FU联用对人结肠腺癌DLD-1立体多细胞球模型和人结肠癌细胞HCT116立体多细胞球模型的作用和可能的作用机制，在动物层面上探讨峨参石油醚部位对人结肠癌HT-29荷瘤裸鼠模型的疗效观察，为了阐述峨参石油醚部位作为一个混合物开发新药的价值，为今后的药物研发和临床提供实验参考价值。
　　方法:
　　(1)cck8法检测峨参石油醚部位分别对人结肠腺癌细胞DLD-1和人结肠癌细胞HCT116平面和立体多细胞球模型的抑制作用，并探讨这种抑制作用与峨参石油醚部位药物浓度的关系;
　　(2)流式细胞技术分析峨参石油醚部位与5-FU联用对人结肠腺癌细胞DLD-1和人结肠癌细胞HCT116立体多细胞球模型的细胞周期以及细胞凋亡的作用，并探讨这种作用与峨参石油醚部位药物浓度的关系;
　　(3) Western blot技术分析峨参石油醚部位与5-FU联用对人结肠腺癌细胞DLD-1和人结肠癌细胞HCT116立体多细胞球模型中p-AKT和INOS蛋白的表达;
　　(4)在细胞层面上，cck8法检测峨参石油醚部位与5-FU联用对人结肠癌HT-29细胞立体多细胞球模型的抑制作用。在动物层面上，峨参石油醚部位与5-FU联用对HT-29荷瘤裸鼠给药，观察裸鼠的活动状态，记录裸鼠的体重，测量肿瘤的体积，计算抑瘤率。
　　结果:
　　(1)峨参石油醚部位对人结肠癌细胞DLD-1、HCT116平面模型、立体多细胞球模型都有不同程度的抑制作用，对DLD-1平面模型IC50=56.67μg/ml，立体多细胞球模型IC50=89.78ug/ml，对HCT116平面模型IC50=35.79μg/ml，立体多细胞球模型IC50=60.59ug/ml，随着峨参石油醚部位药物浓度的升高，这种抑制作用会逐渐地增强;
　　(2)峨参石油醚部位与5-FU联用可以提高对DLD-1、HCT116立体多细胞球模型的抑制作用，这种抑制作用随峨参石油醚部位药物浓度的升高而增强;
　　(3)5-FU作为周期特异性药物可阻滞DLD-1、HCT116细胞于S期，而峨参石油醚部位则阻滞DLD-1细胞于G0/G1期，阻滞HCT116细胞于G2/M期，两种药物联合使用，可以使DLD-1细胞阻滞在S期和G0/G1期，使HCT116细胞阻滞在S期和G2/M期;
　　(4)混合物峨参石油醚部位和临床常用药5-FU两药单用都可以促进DLD-1、HCT116细胞的凋亡，两种药物联合使用可以增强抑制作用，诱导更多的细胞凋亡，并且当峨参石油醚部位浓度的升高，DLD-1细胞和HCT116细胞的凋亡率也逐渐增加;
　　(5)峨参石油醚部位与5-FU联用可以抑制DLD-1、HCT116细胞中p-AKT蛋白与INOS蛋白的表达;
　　(6)峨参石油醚部位与5-FU两药单药可以抑制HT-29移植瘤的生长，使裸鼠的肿瘤体积变小。两药联用可以增强疗效，并且抑制作用随着峨参石油醚部位药物浓度的增加而增强。
　　结论:
　　(1)峨参石油醚部位对人结肠腺癌DLD-1细胞和人结肠癌HCT116细胞平面、立体多细胞球模型都可以抑制细胞的增殖，降低细胞的活力。这种抑制作用随峨参石油醚部位药物浓度的升高而增强;
　　(2)峨参石油醚部位与5-FU联用对人结肠腺癌DLD-1和人结肠癌HCT116细胞的抑制作用，导致两个细胞的周期阻滞发生了变化，细胞的凋亡率也有所升高，这种作用可能与影响了细胞中p-AKT和INOS蛋白的表达有关;
　　(3)峨参石油醚部位与5-FU两药单药可以抑制HT-29移植瘤的生长，使裸鼠的肿瘤体积变小。两药联用可以增强疗效，并且抑制作用随着峨参石油醚部位药物浓度的增加而增强。

目录

声明

摘要

第一章 绪论

1．1 课题研究背景

1．1．1 课题来源

1．1．2 课题研究意义

1．2 峨参研究概述

1．2．1 峨参简介

1．2．2 峨参的药理作用

1．2．3 峨参的化学成分研究

1．3 结肠癌研究现状概述

1．3．1 癌症研究现状概述

1．3．2 结肠癌概述

1．3．3 结肠癌国内外发病趋势

1．3．4 结肠癌防治措施及治疗手段

第二章 峨参石油醚部位与5-FU联用对结肠腺癌DLD-1立体多细胞球模型的作用及机理研究

2．1 实验材料

2．1．1 实验细胞与药物

2．1．2 实验仪器

2．1．3 实验试剂

2．2 实验方法

2．2．1 细胞复苏

2．2．2 细胞传代

2．2．3 DLD-1立体多细胞球模型的构建

2．2．4 cck8法检测峨参石油醚部位对DLD-1平面模型的抑制作用

2．2．5 cck8法检测峨参石油醚部位对DLD-1立体多细胞球模型的抑制作用

2．2．6 cck8法检测5-FU对DLD-1立体多细胞球模型的抑制作用

2．2．7 cck8法检测峨参石油醚部位与5-FU联用对DLD-1立体多细胞球模型的抑制作用

2．2．8 流式细胞技术分析峨参石油醚部位与5-FU联用对DLD-1立体多细胞球模型细胞周期的作用

2．2．9 流式细胞技术分析峨参石油醚部位与5-FU联用对DLD-1立体多细胞球模型细胞凋亡的作用

2．2．10 Western blotting技术分析石油醚部位与5-FU联用对DLD-1立体多细胞球模型中p-AKT、INOS蛋白的作用

2．2．11 统计学分析

2．3 结果

2．3．1 cck8法检测峨参石油醚部位对DLD-1平面模型的抑制作用

2．3．2 cck8法检测峨参石油醚部位对DLD-1立体多细胞球模型的抑制作用

2．3．3 cck8法检测5-FU对DLD-1立体多细胞球模型的抑制作用

2．3．4 cck8法检测峨参石油醚部位与5-FU联用对DLD-1立体多细胞

2．3．5 流式细胞技术分析峨参石油醚部位与5-FU联用对DLD-1立体多细胞球模型细胞周期的作用

2．3．6 流式细胞技术分析检测峨参石油醚部位与5-FU联用对DLD-1立体多细胞球模型细胞凋亡的作用

2．3．7 Western blotting技术分析峨参石油醚部位与5-FU联用对DLD-1立体多细胞球模型中p-AKT、INOS蛋白的作用

2．4 讨论

2．5 小结

第三章 峨参石油醚部位与5-FU联用对结肠癌HCT116立体多细胞球模型的作用及机理研究

3．1 实验材料

3．1．1 实验细胞与药物

3．1．2 实验仪器

3．1．3 实验试剂

3．2 实验方法

3．2．1 细胞复苏

3．2．2 细胞传代

3．2．3 HCT116立体多细胞球模型的构建

3．2．4 cck8法检测峨参石油醚部位对HCT116平面模型的抑制作用

3．2．5 cck8法检测峨参石油醚部位对HCT116立体多细胞球模型的抑制作用

3．2．6 cck8法检测峨参石油醚部位与5-FU联用对HCT116立体多细胞球模型的抑制作用

3．2．7 流式细胞技术分析峨参石油醚部位与5-FU联用对HCT116立体多细胞球模型细胞周期的作用

3．2．8 流式细胞技术分析峨参石油醚部位与5-FU联用对HCT116立体多细胞球模型细胞凋亡的作用

3．2．9 Western blotting技术分析峨参石油醚部位与5-FU联用对HCT116立体多细胞球模型中p-AKT、INOS蛋白的作用

3．2．10 统计学分析

3．3 结果

3．3．1 cck8法检测峨参石油醚部位对HCT116平面模型的抑制作用

3．3．2 cck8法检测峨参石油醚部位对HCT116立体多细胞球模型的抑制作用

3．3．3 cck8法检测峨参石油醚部位与5-FU联用对HCT116立体多细胞球模型的抑制作用

3．3．4 流式细胞技术分析峨参石油醚部位与5-FU联用对HCT116立体多细胞球模型细胞周期的作用

3．3．5 流式细胞技术分析峨参石油醚部位与5-FU联用对HCT116立体多细胞球模型细胞凋亡的作用

3．3．6 Western blotting技术分析峨参石油醚部位与5-FU联用对HCT116立体多细胞球模型中p-AKT、INOS蛋白的作用

3．4 讨论

3．5 小结

第四章 峨参石油醚部位与5-FU联用对结肠癌HT-29荷瘤裸鼠模型的抑瘤作用观察

4．1 实验材料

4．1．1 实验细胞株

4．1．2 实验动物

4．1．3 实验仪器

4．1．4 实验药物

4．2 实验方法

4．2．1 cck8法检测峨参石油醚部位与5-FU联用对HT-29立体多细胞球模型的抑制作用

4．2．2 结肠癌HT-29裸鼠移植瘤模型的创建

4．2．3 动物给药方案

4．2．4 常用指标检测

4．3 结果

4．3．1 cck8法检测峨参石油醚部位与5-FU联用对HT-29立体多细胞球模型的抑制作用

4．3．2 HT-29裸鼠移植瘤模型的创建

4．3．3 实验进程

4．3．4 裸鼠活动状况观察

4．3．5 HT-29荷瘤裸鼠体重变化

4．3．6 肿瘤体积变化

4．3．7 抑瘤率的计算

4．3．8 后续工作及展望

4．4 讨论

4．5 小结

结论

致谢

参考文献

攻读硕士期间发表的论文及科研成果