姜黄的质量控制研究及姜黄色素与茶多酚联用纳米体系的制备、质量控制和体外活性研究

摘要

中药姜黄是传统的中药材，以姜黄素、脱甲氧基姜黄素、双脱甲氧基姜黄素为代表的姜黄素类化合物是其主要的活性成分。JH1是姜黄中一种姜黄素类新天然产物，抗炎活性强。本研究采用LC-MS/MS技术对姜黄药材中姜黄素类化合物进行含量测定，完善了姜黄药材的质量控制体系。本研究建立的 LC-MS分析方法精密度、重现性良好，准确度高，稳定可行。聚类分析结果显示四川、重庆产地的姜黄药材中JH1含量明显高于其它产地。
　　鉴于姜黄素类化合物诸多显著的生物活性，将其开发为新型抗肿瘤药物系统具有极强的潜力，但其水溶性和生物利用度阻碍了临床的应用和新药开发。茶多酚和姜黄色素两者均是源自植物提取物的天然酚类成份，在化学结构上具有相似性，且都有极强的抗氧化作用，具有显著的抑制肿瘤细胞增殖的作用。本研究采用薄膜-超声法将姜黄色素和茶多酚同时包埋于固体脂质纳米粒中，制备成抗癌复方纳米粒，采用HPLC-DAD-ESI/MSn技术，从成分定性分析和定量分析两方面首次建立了CTP-SLNs的质量控制方法，建立了复方制剂的完整质量控制体系；并对其体外抗肿瘤活性进行了初步研究。LC/MS质谱裂解研究表明，姜黄素类和茶多酚类8个活性单体在制剂中稳定存在，制剂性质稳定；HPLC指纹图谱分析显示所制得的20批次复方纳米制剂中有17批的相似度大于99％，所有批次复方纳米制剂的成分基本稳定；采用HPLC-DAD法建立了纳米粒中姜黄色素和茶多酚类共8个活性成分的同步含量测定方法，该方法具有良好的精密度和准确度，重现性良好。制剂各项表征指标正常，在六个月存储期间制剂性质稳定，直径波动很小，没有任何退化或聚合。MTT实验结果显示姜黄色素和茶多酚联用对HepG2和CT-26肿瘤细胞的增殖产生了协同抑制效应；联用固体脂质纳米粒对细胞的毒作用较姜黄素、EGCG、姜黄色素、茶多酚以及姜黄色素与茶多酚混合物更强（P<0.05），体现了固体脂质纳米粒给药载体的优越性，提高了姜黄色素和茶多酚的生物利用度，从而提高了对癌细胞的杀伤力，增加药效。

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1 绪论

1.1 中药姜黄的研究进展

1.1.1 姜黄的概述

1.1.2 姜黄素类化合物的研究瓶颈与解决方法

1.2 固体脂质纳米粒

1.2.1 固体脂质纳米粒简介

1.2.2 固体脂质纳米粒的制备方法

1.3 茶多酚的研究进展

1.3.1 茶多酚的组成及其结构

1.3.2 茶多酚的抗肿瘤作用

1.4 研究内容、立题意义与创新点

1.4.1 研究内容与立题意义

1.4.2 创新点

2 姜黄药材中姜黄素类化合物的LC-MS/MS定量研究

2.1 材料与方法

2.1.1 材料与仪器

2.1.2 定量分析的液相和质谱条件

2.1.3 药材供试品溶液制备

2.1.4 对照品溶液制备

2.1.5 数据分析

2.2 结果与分析

2.2.1 MRM模式的离子对选择

2.2.2 方法学验证

2.2.3 定量研究-不同产地姜黄药材中四种姜黄素类化合物的定量分析

2.2.4 聚类分析

2.3 本章小结

3 姜黄色素与茶多酚联用固体脂质纳米粒制备和质量控制研究

3.1 材料与方法

3.1.1 材料与仪器

3.1.2 CTP-SLNs的制备方法和表征研究

3.1.3 定性研究：CTP-SLNs活性成分的质谱鉴定

3.1.4 定性研究：20批次CTP-SLNs的指纹图谱研究

3.1.5 定量研究：CTP-SLNs活性成分的含量测定

3.2 结果与分析

3.2.1 CTP-SLNs的表征考察

3.2.2 色谱条件优化

3.2.3 含量测定方法学验证

3.2.4 CTP-SLNs中姜黄素和茶多酚类化合物质谱鉴定

3.2.5 不同批次CTP-SLNs中活性成分的含量测定

3.2.6 不同批次CTP-SLNs的指纹图谱研究

3.3 本章小结

4 CTP-SLNs体外抗肿瘤活性初评

4.1 试剂与仪器

4.1.1 试剂与药品

4.1.2 实验仪器

4.2 实验部分

4.2.1 实验原理

4.2.2 实验方法

4.2.3 结果与讨论

4.3 本章小结

结论

参考文献

攻读硕士学位期间发表论文科研成果

致谢