黑曲霉N25植酸酶phyA基因玉米表达载体的构建

摘要

以该课题组测定出的黑曲霉N25植酸酶phyA基因为目的基因(GenBank Accession No.AF218813),从信号肽序列切割位点序列之后设计上游引物(设计一个XbaⅠ酶切位点);在终止密码子处设计下游引物(设计一个KpnⅠ酶切位点).用高保真度的聚合酶进行扩增,得到了大小约1.4kb的单一条带产物,即为phyA表达片段.将该产物经XbaⅠ和KpnⅠ酶切处理后连接到含有胚乳特异性启动子(EGH5 promoter)的中间载体pBPC47的多克隆位点上,转化大肠杆菌JM109菌株,在含100μg/mL的Amp抗性的LB平板上筛选到了的阳性菌落.以胚乳特异民生启动子构建植酸酶基因的玉米表达载体,以玉米种子作为植物生物反应器生产植酸酶在国内外尚属首次.在玉米种子中特异性生产植酸酶,符合未来饲料的营养要求,可为生产廉价、高效、方便的植酸酶提供新途径,便于植酸酶的推广使用,有重要的学术价值和应用前景.该重组质粒现已转化玉米愈伤组织,分化出的幼苗已移栽大田.

目录

摘要

一、前言

二、试验材料及仪器

三、试验方法

四、结果

1.黑曲霉N25植酸酶phyA基因表达片段的PCR扩增反应

2.植酸酶phyA基因中间载体转化子的筛选

3.重组质粒的酶切电泳鉴定

4.黑曲霉N25植酸酶phyA基因表达载体的构建

5.植酸酶phyA基因表达片段序列酶切位点分析

6.phyA基因表达载体筛选及鉴定

7.pBCA转化玉米自交系18-599

五、讨论

六、结论

致谢

参考文献

附录

声明