植原体侵染对泡桐组培苗酶的影响及相关基因片段克隆研究

摘要

该试验分为三部分,第一部分是外施药剂对泡桐病健组培苗过氧化物酶(POD)和吲哚乙酸氧化酶(IAAO)活性的影响,第二部分是与植原体侵染相关的酶蛋白纯化,第三部分是与植原体侵染相关的POD基因片断克隆.通过外源使用植物生长调节物质(NAA和6-BA)和一种酚类物质(SA)处理泡桐无性系病健组培苗,结果表明,NAA处理后,在第一周适宜的浓度可以降低因损伤引起POD活性升高的代谢反应,在第二和第四周,POD活性升高总体上随着药剂浓度的升高而升高,而对于IAAO的活性变化两无性系间的变化趋势差异较大,NAA处理后植株的生根能力增强,对生长有一定的促进作用:6-BA处理后,POD和IAAO的活性在各周次的测定中都出现活性下降,在形态上健康苗出现类似病苗的症状,病苗的症状加重;SA处理后病健苗都出现POD活性升高,IAAO活性下降,在处理浓度范围内,SA的加入抑制了健康苗的生长,促进了病苗的生长;在提取酶液时加入PVP-P除去酚类物质,POD的活性明显上升,IAAO的活性略有下降,酚类物质可以抑制POD的活性,提高IAAO的活性.运用泡桐病健组培苗进行酶蛋白的抽提,酶的纯化过程包括匀浆、(NH4)2S04沉淀、阴离子DEAE-sephadex A50和阳离子CM-52交换层析,纯化和鉴定了一种在病苗中表达量特异性升高的POD,对该酶进行高效液相色谱分析可知,该酶的纯度已达到99﹪以上,比活力达到371U/mg.对泡桐病健组培苗对照进行POD酶基因诱导表达的研究,通过分子生物学的方法,从病苗中克隆出一段长度为871bp的POD酶基因片断,而健康苗中则没有表达.该序列是一段不含有内含子的3'末端编码序列,编码一段长度为219个氨基酸残基、分子量为24074的肽段,该片断可能与植原体侵染后POD活性表达升高有关.

目录

文摘

英文文摘

1.文献综述

1.1植原体与泡桐丛枝病

1.1.1泡桐丛枝病的发生与危害

1.1.2泡桐丛枝病的病原及其特性

1.1.3泡桐丛枝病的防治策略

1.2泡桐丛枝病症状与植株体内激素代谢的关系

1.2.1吲哚乙酸的生理作用和代谢

1.2.2植原体对寄主症状和代谢的影响

1.2.3外源药剂处理对激素代谢的影响

1.3植物过氧化物酶与吲哚乙酸氧化酶

1.3.1植物过氧化物同工酶

1.3.2吲哚乙酸氧化酶

1.3.3植物过氧化物酶和吲哚乙酸氧化酶的异同

1.4本研究目的、总体思路和技术路线

2实验部分

2.1不同药剂处理对泡桐不同无性系组培苗过氧化物酶和吲哚乙酸氧化酶的影响

2.1.1材料和方法

2.1.2结果与分析

2.2与泡桐丛枝病植原体侵染相关的过氧化物酶和吲哚乙酸氧化酶蛋白的纯化

2.2.1材料和方法

2.2.2结果与分析

2.3与植原体侵染相关的过氧化物酶基因的克隆

2.3.1材料

2.3.2方法

2.3.3结果与分析

3结论

4讨论

4.1机械损伤和植原体侵染对泡桐POD和IAAO代谢的影响

4.2外施药剂对泡桐组培苗POD和IAAO的影响

4.2.1NAA处理对POD和IAAO的影响

4.2.2 6-BA处理对POD和IAAO的影响

4.2.3 SA处理对POD和IAAO的影响

4.3泡桐POD和IAAO之间的异同

4.4植原体侵染对泡桐POD和IAAO基因的诱导表达作用

参考文献

致谢