广元市青川县油橄榄种质资源的形态学和RAPD分析研究

摘要

本论文依托校县合作项目，于2005年对四川省广元市青川县油橄榄资源进行了全面调查和优良单株初选。主要利用形态学和RAPD技术对青川县优良的油橄榄种质资源进行了研究。油橄榄的种质资源调查选优涉及该县7个乡镇：沙州镇、营盘乡、木鱼乡、骑马乡、姚渡镇、洞水乡、板桥乡。对筛选出来的188株优树，利用主成分分析法分析其形态指标的内在联系，并探索了适宜的RAPD反应体系和扩增程序。用200条引物进行筛选，得到14条多态性较好的引物，用于聚类分析，建立了UPGMA聚类分析图。研究结果如下： 1.13个形态指标描述统计说明：干高、干粗的变异系数最大，树高与叶柄长次之，其余9个指标都低于百分之二十。其中果形指数、核形指数、叶形指数的变异系数的大小顺序依次为：叶形指数、果形指数、核形指数，说明核形指数是较为稳定的一个指标。 2.形态指标的因子分析结果表明：可提取出4个主成分，贡献量为75.636％。其中在fac-1中，干高、干粗、树形有较高的负载荷，可以说fac-1是树形指标；fac-2中，核形指数和果形指数有较高的负载荷，可以说fac-2是果形指标；fac-3中，叶形指数有较高的负载荷，fac-3是叶形指标；fac-4中树势和树高有较高的负载荷，可以说fac-4是树势指标。 3.指标间的相关性分析结果表明：果形系数、核形系数、叶形系数和叶柄长度，是油橄榄品种鉴别和优树选择的重要指标；树高、树势、树形、冠形、干粗和干高，不能作为油橄榄品种分类和优树选择的划分指标，只能作为参考指标。 4.采用CTAB法从油橄榄叶片中提取出基因组DNA，经检测发现，CTAB法获得的DNA完整性好，浓度适中，可用于进一步油橄榄的RAPD标记研究。 5.经过对油橄榄RAPD反应体系及程序的摸索，建立了适合油橄榄分子标记的RAPD体系，为该树种以后的分子生物学研究奠定了基础。 反应程序为：94℃预变性3min，94℃变性1min，36℃退火1min，72℃延伸1mm30s；38个循环；72℃延伸7min：4℃保存。 反应体系(25gl反应体系)：dNTP 0.54μl(10mM)，Mg<'2+>2.4μl(25mM)，Taq酶0.4μl(2.5U/μl)，Tap Reaction Buffer 2μl(10×)，Primer 0.3μl(5lpm/μl)，DNA2μl(20ng/μl)，ddH20 12.36μl。 6.对200条RAPD引物进行筛选，确定出扩增产物多态性明显，并可获得清晰、重复性好的条带的14条引物，用于对188个DNA样品进行PCR扩增。扩增产生了149条DNA片段，长度处于150bp～2000bp之间，其中具有多态性的条带147条，多态性指数占98.66％。平均每个引物可扩增出11条多态性带。表明青川县油橄榄的多态性水平较高。 7.188个样品间的平均遗传距离为0.29，变化范围在0.02～0.68之间。通过非加权成对群算术平均法(UPGMA)聚类分析，以遗传相似系数0.70为阈值，可将188个样品划分为4组。由聚类结果发现，青川县油橄榄在单一林地上，品种单一，没有充分考虑到品种间的合理搭配。

目录

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引言

1文献综述

1.1油橄榄的生物学特征

1.2油橄榄的生态学特性

1.3油橄榄的分布范围和利用价值

1.3.1油橄榄的分布范围

1.3.2油橄榄的利用价值

1.4栽培起源及研究简史

1.4.1品种鉴定和分类的研究

1.4.2品种适应性和丰产性的研究

1.4.3其它方面的研究

1.5主成分分析和RAPD技术在油橄榄种质资源中的应用

1.5.1主成分在油橄榄种质资源中的应用

1.5.2 RAPD在油橄榄种质资源中的应用

1.6本实验研究的目的和意义

2实验研究技术路线

3材料与方法

3.1青川县自然条件概况和种植现状

3.2实验材料

3.3形态指标及其测定分析

3.3.1形态学指标

3.3.2指标的测定、记录与分析

3.4 RAPD标记及其主要操作

3.4.1主要试剂

3.4.2主要仪器

3.4.3实验方法

4结果与分析

4.1形态指标分析结果

4.1.1形态指标的描述

4.1.2形态指标的因子分析

4.1.3指标的相关性分析

4.2 RAPD标记分析结果

4.2.1油橄榄基因组DNA提取方法的比较

4.2.2油橄榄RAPD扩增程序和扩增体系的优化

4.2.3扩增引物的筛选

4.2.4油橄榄遗传多样性分析

4.2.5聚类分析

4.3结论

5问题与展望

5.1形态特征的可靠性

5.2 PAPD标记的可靠性

5.2.1材料处理

5.2.2 DNA模板的完整性和纯度

5.2.3 RAPD扩增反应的条件

5.3展望

参考文献

致谢

硕士期间发表的文章

附图