微生物发酵法酶解蛋白及其对黄羽肉鸡生产性能和肠道菌群的影响

摘要

本实验利用枯草芽孢杆菌产蛋白酶特性，优化最佳产酶条件，并添加外源酶降解蛋白生成小肽。将含有益生菌的复合小肽作为蛋白源饲喂肉鸡，检测其生产性能，并用PCR-DGGE技术检测肉鸡肠道菌群变化情况。 选取本实验室分离保存的一株芽孢杆菌，经16SrRNA鉴定为枯草芽孢杆菌。用Folin-酚法测定影响细菌产蛋白酶的几种主要因素(温度、起始pH、时间、接种量)在不同条件下对酶活力的影响，根据单因素条件下的测定结果，设计四因素三水平正交实验(L9(34))，确定最佳产酶条件为：温度30℃，起始pH7.5，发酵时间18h，接种量1％。 利用芽孢杆菌和外源酶酶解蛋白，并优化外源酶酶解条件(Alcalase添加量、flavourzyme添加量、酶解pH值、酶解时间)，根据单因素条件下的测定结果，设计四因素三水平正交实验(L9(34))，确定酶解条件为：Alcalase蛋白酶添加量为0.016AU/g，flavourzyme风味复合蛋白酶添加量达到25LAPU/g，酶解温度为60℃，酶解时间为5h。酶解蛋白产物成品每克含小肽67.53％，氨基氮15.47％，水解度27.65％，芽孢杆菌活菌数1.825×108CFU/g。 将复合小肽按1.2％、0.8％、0.5％、0.3％添加于日粮中饲喂黄羽肉鸡，检测对生产性能影响。结果表明，试验组二(添加0.8％)与对照组相比，总增重高出31.04％，差异极显著(P＜0.01)；料肉比降低了17.29％，差异显著(P＜0.05)；腹泻率降低5.95％，差异极显著(P＜0.01)。试验组一(添加1.2％)总增重效果差异显著(P＜0.05)；料肉比差异显著(P＜0.05)；腹泻率差异极显著(P＜0.01)。试验组三、四与对照组相比，总增重和料肉比效果差异均不显著(P＞0.05)；腹泻率差异极显著(P＜0.01)。 采集试验效果最佳一组(添加量0.8％)与对照组不同试验周粪样进行肠道菌群组成及多样性分析，结果表明试验初期肠道菌群数量较少，并无规律性。3周时肠道菌群相似性升高，多样性增加。6周时试验组比对照组菌群数量增加18％，并有一条特异性条带出现，表明复合小肽对维持肉鸡肠道菌群稳定，增加菌群多样性方面有明显效果。

目录

文摘

英文文摘

声明

1选题背景：

2文献综述

2.1大豆蛋白的组成

2.2玉米蛋白的组成

2.3蛋白质的降解方法研究

2.3.1杆菌类蛋白酶

2.3.2真菌类蛋白酶

2.3.3其他细菌蛋白酶

2.4蛋白酶解产物的营养价值

2.4.1小肽的吸收机制

2.4.2小肽吸收的特异性

2.4.3小肽的功能

2.5 DGGE指纹图谱技术在动物肠道菌群微生物群落中的应用

2.5.1 DGGE技术原理

2.3.2 DGGE技术的缺点

2.3.3 DGGE在肠道菌群微牛物中的应用

3实验目的和意义

4材料方法：

4.1实验材料

4.1.1菌株

4.1.2外源蛋白酶

4.1.2实验动物

4.1.3培养基

4.1.4主要试剂

4.1.5主要仪器

4.2实验方法

4.2.1芽孢杆菌的鉴定及产蛋白酶特性鉴定

4.2.2芽孢杆菌产酶条件优化

4.2.3芽孢杆菌酶解蛋白产物检测

4.2.4添加外源酶酶解条件的确定

4.2.5芽孢杆菌和外源酶联合酶解正交实验

4.3检测方法

4.3.1蛋白酶活性检测：Folin-酚法

4.3.2小肽品质检验指标

4.4复合小肽对黄羽肉鸡生产性能的影响

4.4.1动物实验分组

4.4.2利用PCR-DGGE技术分析黄羽肉鸡肠道菌群变化

5结果与讨论

5.1芽孢杆菌菌种鉴定结果

5.2产蛋白酶枯草芽孢杆菌筛选实验结果

5.3发酵条件对蛋白酶活力的影响

5.3.1发酵培养基底物比例的影响

5.3.2培养时间对产酶活力的影响

5.3.3起始pH对产酶活力的影响

5.3.4接种量对产酶活力的影响

5.3.5温度对产酶活力的影响

5.3.6影响蛋白酶活力因素正交实验

5.3.7芽孢杆菌酶解蛋白产物检测

5.4外源酶酶解蛋白条件优化

5.4.1 pH值对酶解蛋白的影响

5.4.2温度对酶解蛋白的影响

5.4.3酶浓度对酶解蛋白的影响

5.4.4酶解时间对酶解蛋白的影响

5.4.5复合风味蛋白酶flavourzyme浓度对酶解蛋白的影响

5.4.6双酶解正交结果

5.5芽孢杆菌和外源酶联合酶解蛋白结果

5.6酶解蛋白成品指标检测

5.7动物实验结果

5.7.1生产性能及腹泻率结果

5.7.2粪样细菌总DNA提取结果

5.7.3细菌16S rDNA V3区PCR扩增结果

5.7.4不同试验周黄羽肉鸡PCR-DGGE图谱及相似性结果

6讨论

6.1芽孢杆菌产酶条件及微生物发酵

6.2外源酶酶解蛋白条件优化

6.3复合小肽对黄羽肉鸡生产性能影响

6.4复合小肽对黄羽肉鸡肠道菌群变化影响

7结论

参考文献：

致谢