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1文献综述
1.1 松树及其分布
1.2 松树落针病及其病原
1.2.1 病害症状
1.2.2 病害分布及危害
1.2.3 松落针病病原及发病规律
1.3 散斑壳属菌的分类
1.3.1 散斑壳属的分类地位及研究进展
1.3.2 松针上散斑壳的分类
1.4 分子生物学技术在植物病原真菌研究中的应用
1.4.1 遗传标记
1.4.2 PCR技术
1.4.3 限制性片段长度多态性(RFLP)
1.4.4 随机扩增多态性DNA技术(RAPD)
1.4.5 核酸序列分析
1.4.6 rRNA基因ITS区序列分析在真菌分类鉴定及系统学研究中的应用
1.5 分子生物学技术在松生散斑壳属真菌研究中的应用
1.6 四川松树落针病及其病原菌研究进展
1.7 本研究的目的、意义及拟解决的主要问题
2四川松树针叶上散斑壳菌的形态学分类与分离培养
2.1 样品的采集与整理
2.2 形态学鉴定
2.2.1 外部形态观察
2.2.2 制片及显微检查
2.2.3 描述及绘图
2.3 发病率的统计
2.4 培养性状的观察及记载
2.4.1 病原菌的分离培养
2.4.2 培养性状的观察
2.5 四川松树针叶上散斑壳菌种的形态描述及种的检索表
2.5.1 针叶树散斑壳
2.5.2 松针散斑壳
2.5.3 四川散斑壳
2.5.4 印度散斑壳
2.5.5 南方散斑壳
2.5.6 二郎山散斑壳
2.5.7 库曼散斑壳
2.5.8 分种检索表
2.6 四川松树林区松落针病发病情况及病原菌
2.7 培养性状的记述
2.8 人工培养条件下散斑壳菌无有性态产生
3四川松树散斑壳菌的RAPD分子标记及遗传多样性分析
3.1 供试菌株
3.2 仪器与试剂
3.2.1 主要试剂
3.2.2 仪器设备
3.3 菌丝体的培养与收集
3.4 DNA的提取及检测
3.4.1 DNA的提取
3.4.2 DNA的检测及定量
3.5 基因组DNA的PCR扩增
3.5.1 引物的筛选
3.5.2 RAPD反应体系的优化
3.5.3 反应条件的建立
3.5.4 反应产物的检测
3.5.5 数据处理
3.6 散斑壳菌的RAPD标记与遗传多样性分析
3.6.1 DNA的提取及引物的筛选
3.6.2 PCR反应条件的优化
3.7 散斑壳菌的RAPD结果分析
3.7.1 散斑壳RAPD分析的最佳反应条件
3.7.2 扩增图谱的特征
3.7.3 遗传相似性的系统聚类分析
4四川松树散斑壳菌的rRNA基因ITS区的PCR、克隆和序列分析
4.1 试验菌株
4.2 药品和试剂
4.2.1 常规药品及试剂
4.2.2 培养基
4.2.3 分子生物学试剂
4.3 主要仪器设备
4.4 实验方法
4.4.1 散斑壳真菌细胞总DNA的提取
4.4.2 散斑壳属不同种rRNA基因ITS区的PCR扩增
4.4.3 不同种散斑壳rRNA基因ITS区的PCR扩增片段的克隆
4.4.4 克隆片段的DNA序列测定及分析
4.5 结果与分析
4.5.1 散斑壳属不同菌株rRNA基因ITS区序列
4.5.2 散斑壳属不同菌株rRNA基因ITS序列的系统发育分析
4.6 与不同散斑壳菌株的RAPD聚类结果的对比分析
5讨论与结论
5.1 四川松针散斑壳菌的种群结构复杂多样
5.2 改良氯化苄法、改良二次沉淀法是散斑壳菌总DNA的提取的有效方法
5.3 四川松树上散斑壳菌遗传多样性丰富
5.4 四川松针散斑壳属菌株rRNA基因ITS区序列分析
主要参考文献
附图
已发表与论文有关的学术论文及待发表文章
致谢