产植酸酶乳酸杆菌的筛选及对肉鸡生长性能和粪磷排出量的影响

摘要

本研究从健康鸡的肠道分离和筛选到一株高产植酸酶乳酸杆菌，对该菌株从粗酶活性和生物学鉴定方面进行评价。采用冷冻干燥技术将其制成冻干菌粉，用于饲养试验，研究产植酸酶乳酸杆菌对肉鸡的生长性能、屠宰性能、免疫器官指数、回肠菌群、粪便磷钙排出量的影响。其主要内容和结果如下： 1．通过MRS-MOPS培养基从4只健康鸡肠道分离、纯化到39株乳酸杆菌，经过鉴别培养基筛选，ALP颜色反应初筛到5株植酸酶活力较高的菌株，再进一步测定这5株菌的植酸酶和磷酸酶的粗酶活性，最终筛选到一株高产植酸酶乳酸杆菌B9，其粗酶活性在pH5．0条件下为15．97U/mL，在pH7．2条件下为16．13U/mL。 2．通过形态学观察，并采用分子生物学技术，从16S rRNA序列同源性和系统发育角度鉴定乳酸杆菌B9为Lactobacillus plantarum。 3．饲养试验选用1日龄白羽肉鸡150羽，随机分为5组（每组设6个重复，每个重复5羽），第1、2、3组的日粮分别添加0．05％、0．1％、0．2％的产植酸酶乳酸杆菌B9冻干菌粉（1．5×109CFU/g），第4组的日粮添加600U/Kg的植酸酶，第5组为空白对照组，饲喂玉米-豆粕型基础日粮，饲养时间为42d。饲养试验结果表明： （1）生长性能：在平均日增重方面，与空白对照组相比，第1、2、3组肉鸡1～6周的平均日增重分别提高了8．26％（P<0．01）、9．88％（P<0．01）、7．15％（P<0．01）；与植酸酶对照组相比，各试验组分别提高2．40％（P>0．05）、3．94％（P<0．05）、1．35％（P>0．05）；植酸酶对照组比空白对照组提高5．72％（P<0．01）。在料肉比方面，1、2、3组较空白对照组分别降低了2．45％（P<0．01）、4．41％（P<0．01）、0．49％（P<0．01）；各试验组较植酸酶对照组分别降低了1．97％（P<0．01）、3．94％（P<0．01）、0．00％（P>0．05）；植酸酶对照组比空白对照组降低了0．49％（P<0．05）。在肉鸡日粮中添加产植酸酶乳酸杆菌（0．1％，1．5×109 CFU/g）极显著提高肉鸡全期平均日增重（P<0．01），极显著降低肉鸡料肉比（P<0．01）。 （2）屠宰性能：第1、2、3组的屠宰性能（屠宰率、半净膛率、全净膛率、腿肌率和胸肌率）明显好于空白对照组和植酸酶对照组。第1、2、3组的屠宰性能随着菌粉添加量的增加有降低的趋势。在肉鸡日粮中添加产植酸酶乳酸杆菌（0．05％，1．5×109CFU/g）极显著提高肉鸡屠宰性能（P<0．01）。 （3）免疫器官指数：第1、2、3组的免疫功能（胸腺指数、脾脏指数和法氏囊指数）与空白对照组相比，显著增强。第1、2、3组的免疫器官指数有先减小再增大的趋势。在肉鸡日粮中添加乳酸杆菌（0．05％，1．5×109CFU/g）极显著提高肉鸡免疫器官指数（P<0．01）。 （4）回肠菌群：第1、2、3组的回肠菌群与空白对照组相比，除处理1的厌氧菌外，回肠菌群数量差异显著，试验组回肠中的双歧杆菌、乳酸菌、类杆菌和总厌氧菌数量均上升，而肠杆菌、肠球菌和总需氧菌数量均下降，肠道健康指数B/E值明显升高，表明在肉鸡日粮中添加产植酸酶乳酸杆菌（0．2％，1．5×109CFU/g），回肠段菌群的生态环境已达到平衡。 （5）粪便钙磷排出量：从21d到42d，第1、2、3组肉鸡的粪便钙磷含量比空白对照组显著降低（P<0．05）。第3组的粪便钙磷含量最低，从28d开始与植酸酶对照组差异显著（P<0．05），42d差异极显著（P<0．01）。说明添加0．05％以上的菌粉在基础日粮中能有效降低肉鸡粪便钙磷的排出量，效果与添加600U/Kg植酸酶相当。在肉鸡日粮中添加乳酸杆菌（0．2％，1．5×109CFU/g）可显著降低肉鸡粪便钙磷含量（P<0．05）。

目录

文摘

英文文摘

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声明

1.文献综述

1.1 选题背景

1.2 磷的营养作用

1.3 植酸及其抗营养作用

1.3.1 植酸的结构

1.3.2 植物饲料中植酸的含量

1.3.3 植酸及其盐类的抗营养作用

1.3.4 植酸抗营养作用的消除

1.3.5 植酸引起的环境问题

1.4 植酸酶的种类及其性质

1.5 国内外微生物产植酸酶研究的现状

1.5.1 产植酸酶的微生物研究

1.5.2 植酸酶测定方法的研究

1.5.3 植酸酶的基因工程进展

1.5.4 植酸酶的研究展望

1.5.5 在植酸酶研究中急待解决的问题

1.6 乳酸杆菌的研究概况

1.6.1 乳酸杆菌的作用机理

1.7 研究的目的与意义

2.材料与方法

2.1 试验材料

2.1.1 样品采集

2.1.2 培养基

2.1.3 主要试验试剂

2.1.4 试验仪器

2.2 试验方法

2.2.1 产植酸酶乳酸杆菌的分离

2.2.2 产植酸酶乳酸杆菌高活力菌株的筛选

2.2.3 产植酸酶乳酸杆菌B9的鉴定

2.2.4 产植酸酶乳酸杆菌制剂的制备

2.2.5 动物试验设计

2.2.6 试验数据处理

3.结果与分析

3.1 产植酸酶乳酸杆菌的分离和筛选

3.2 产植酸酶乳酸杆菌B9 的鉴定

3.2.1 生长曲线

3.2.2 形态学

3.2.3 发酵特性分析与种的鉴定

3.2.4 16sDNA序列测定和分析

3.3 产植酸酶乳酸杆菌冻干菌粉活菌数测定

3.4 产植酸酶乳酸杆菌对肉鸡生长性能的影响

3.4.1 产植酸酶乳酸杆菌对肉鸡平均日增重的影响

3.4.2 产植酸酶乳酸杆菌对肉鸡料重比的影响

3.5 产植酸酶乳酸杆菌对肉鸡屠宰性能的影响

3.6 产植酸酶乳酸杆菌对肉鸡免疫器官指数的影响

3.6.1 35日龄肉鸡的免疫器官指数

3.6.2 49日龄肉鸡的免疫器官指数

3.7 产植酸酶乳酸杆菌对肉鸡回肠菌群的影响

3.8 产植酸酶乳酸杆菌对肉鸡粪便钙磷排出量的影响

3.8.1 肉鸡粪便中磷的含量测定结果

3.8.2 肉鸡粪便中钙的含量测定结果

4.讨论

4.1 产植酸酶乳酸杆菌的筛选

4.2 产植酸酶乳酸杆菌的鉴定

4.3 产植酸酶乳酸杆菌制剂的制备

4.4 产植酸酶乳酸杆菌对肉鸡生长性能的影响

4.5 产植酸酶乳酸杆菌对肉鸡屠宰性能的影响

4.6 产植酸酶乳酸杆菌对肉鸡免疫器官指数的影响

4.7 产植酸酶乳酸杆菌对肉鸡回肠菌群的影响

4.8 产植酸酶乳酸杆菌对肉鸡粪便钙磷排出量的影响

4.9 本研究的创新点

5.结论

参考文献

致谢

攻读硕士期间发表论文情况