红花羊蹄甲组织培养及植株再生体系的研究

摘要

本研究以红花羊蹄甲(Bauhinia blakeana)当年生幼嫩带芽茎段、叶片和叶柄为试验材料，通过正交实验设计结合方差分析，探讨了红花羊蹄甲离体培养的关键影响因素，存在问题及解决方法，对红花羊蹄甲无菌苗诱导、茎段和叶片、叶柄愈伤组织诱导及分化、壮苗生根、炼苗与移栽等方面进行了研究，以得到最佳培养配方及培养程序，从而为建立红花羊蹄甲的快繁体系、工厂化生产提供理论与技术依据。
　　 通过组织培养技术研究得出：
　　 ①红花羊蹄甲外植体组织培养最佳取材时间为3月，启动率高，污染率相对其它时期较低，茎段、叶片和叶柄的启动率分别为91.6％、81.8％和89.5％，污染率分别为21.6％、19.3％和19.6％。
　　 ②用0.1％的升汞灭菌，茎段的最佳灭菌时间为8min，叶片为4min，叶柄为6min。
　　 ③初代培养：茎段培养以MS+6-BA2.0mg·L-1+NAA0.01mg·L-1+IBA0.5mg·L-1为最适宜培养基配方，启动率高达91.4％，愈伤组织诱导率81.2％，出芽指数1.8；叶片愈伤组织诱导培养以MS+6-BA1.0mg·L-1+NAA0.1mg·L-1+2，4-D0.1mg·L-1为最适宜培养基配方，愈伤组织诱导率为75.6％；叶柄愈伤组织诱导培养以MS+6-BA0.5mg·L-1+NAA0.1mg·L-1+2，4-D0.05mg·L-1为最适宜培养基配方，愈伤组织诱导率为71.8％。
　　 ④继代培养：适宜于芽继代增殖培养的最优组合是MS+6-BA1.0mg·L-1+NAA0.1mg·L-1+1BA0.5mg·L-1，增殖倍数达3.7，有效苗数2.7;适宜于茎段愈伤组织继代增殖培养的最优组合是MS+6-BA0.5mg·L-1+NAA0.1mg·L-1+2，4-D0.5mg·L-1，增殖倍数达4.4;适宜于茎段愈伤组织分化培养的最优组合是MS+6-BA1.0mg·L-1+NAA1.0mg·L-1，分化率达85.9％。
　　 ⑤有效苗的培养：以MS培养基为最适宜培养基配方，植株生长健壮，有效苗率为85.9％。
　　 ⑥生根培养：以MS+IBA1.0mg·L-1为最适宜培养基配方，植株生长健壮，生根率最高，达76.8％，平均根数最多，为3.3条，平均根长为5.1cm。
　　 ⑦移栽与炼苗：炼苗基质以蛭石、珍珠岩、河沙以1：1：2的比例效果最好，成活率较高，达到73.5％，且植株长势良好。

目录

文摘

英文文摘

1 前言

2 文献综述

2.1 红花羊蹄甲的概况

2.1.1 红花羊蹄甲的生物学特性

2.1.2 红花羊蹄甲的价值

2.1.3 红花羊蹄甲的繁殖

2.2 羊蹄甲属植物的研究现状

2.2.1 组织培养研究现状

2.2.2 其他研究

2.3 影响木本植物组织培养的因素

2.3.1 培养基成分

2.3.2 外植体的选择

3 目的与意义

4 试验技术路线及设计方案

4.1 试验材料

4.2 技术路线

4.3 试验设计方案与方法

4.3.1 初代培养

4.3.2 继代增殖培养

4.3.3 有效苗培养

4.3.4 生根培养

4.3.5 炼苗与移栽

5 试验数据的统计与数据统计分析方法

5.1 试验结果观测

5.1.1 材料的处理与试验

5.1.2 初代培养

5.1.3 继代增殖与分化培养

5.1.4 有效苗(壮苗)培养

5.1.5 生根培养

5.1.6 炼苗与移栽

5.2 数据统计分析方法

6 组织培养试验结果与分析

6.1 材料的处理试验

6.1.1 不同时期取健康植株为外植体的试验

6.1.2 表面灭菌方式试验

6.2 初代培养激素配方筛选试验结果与分析

6.2.1 茎段试验结果与分析

6.2.2 愈伤组织诱导的试验结果与分析

6.3 继代增殖培养激素配方筛选试验结果与分析

6.3.1 新梢继代增殖试验结果与分析

6.3.2 愈伤组织的继代增殖培养试验结果与分析

6.3.3 愈伤组织的分化培养试验结果与分析

6.4 有效苗(壮苗)培养激素配方筛选试验结果与分析

6.5 生根培养激素配方筛选试验结果与分析

6.5.1 对生根率的影响

6.5.2 对平均根长的影响

6.5.3 对平均根数的影响

6.5.4 对生根的综合影响

6.6 炼苗与移栽试验结果与分析

7 结论

7.1 材料的处理试验

7.1.1 不同时期取健康植株为外植体的试验

7.1.2 表面灭菌方式试验

7.2 初代培养激素配方筛选试验

7.2.1 以茎段为外植体的试验

7.2.2 以叶片和叶柄为外植体的试验

7.3 继代增殖培养试验

7.3.1 新梢继代增殖的试验

7.3.2 愈伤组织继代增殖的试验

7.3.3 愈伤组织分化的试验

7.4 有效苗(壮苗)培养试验

7.5 生根培养试验

7.6 炼苗与移栽

8 讨论与建议

8.1 材料消毒

8.2 组织培养中基本培养基的影响

8.3 激素对红花羊蹄甲器官分化的影响

8.3.1 激素对茎段腋芽分化的影响

8.3.2 激素对叶片分化的影响

8.3.3 激素对茎段愈伤组织分化的影响

8.4 组织培养中叶片和叶柄愈伤组织难以分化成芽的原因

9 进一步研究的内容

参考文献

致谢

硕士期间发表的文章

图版

附表