黄曲霉毒素B1对雏鸡小肠黏膜免疫损伤影响的研究

摘要

小肠对于禽类的生长发育具有重要意义，它不仅是消化吸收的主要场所，在黏膜免疫方面也发挥着重要作用。当动物摄入的日粮中含AFB1时，会导致小肠中含有较高浓度的AFB1，并且AFB1会对肠道产生不利影响。目前有关AFB1对动物机体毒副作用的研究逐渐被人们重视，也取得了一定的成果，然而关于AFB1对小肠黏膜免疫影响的研究鲜有报道。本研究选用1日龄科宝肉鸡健雏156只，随机分为2组分别饲喂对照组日粮(0mg/kg AFB1)和AFB1组日粮(0.6mg/kg AFB1)21日。用光镜、电镜技术、流式细胞术、SABC免疫组化染色和qRT-PCR等方法研究日粮中AFB1对雏鸡小肠黏膜免疫相关因子的动态变化，探讨AFB1对雏鸡小肠黏膜免疫功能影响的规律及作用机理。其结果如下:
　　与对照组相比，AFB1组雏鸡体重在7、14和21日龄时显著降低(p＜0.01或p＜0.05)。光镜和电镜结果显示AFB1组十二指肠、空肠和回肠绒毛上皮脱落;吸收细胞微绒毛脱落，线粒体嵴断裂且内容物发生溶解呈空泡状，胞质电子密度降低，细胞连接不规则。与对照组相比，AFB1组的十二指肠、空肠和回肠绒毛高度和绒毛隐窝比值显著降低(p＜0.01或p＜0.05)，而隐窝深度显著升高(p＜0.01或p＜0.05)（除7日龄十二指肠和空肠微绒毛高度和7，14日龄回肠微绒毛高度;7日龄十二指肠和回肠绒毛隐窝比值以及隐窝深度以外）。试验期间AFB1组小肠杯状细胞数量显著低于对照组(p＜0.01或p＜0.05)（除7日龄十二指肠和回肠以外）。
　　流式细胞术检测结果显示AFB1组十二指肠固有层CD3+淋巴细胞比率在14和21日龄时显著(p＜0.05)低于对照组;AFB1组十二指肠上皮和固有层CD3+CD4+淋巴细胞在14和21日龄时显著(p＜0.01或p＜0.05)低于对照组，而CD3+CD8+淋巴细胞仅在21日龄时显著(p＜0.01或p＜0.05)低于对照组。试验期间，AFB1组空肠和回肠上皮及固有层CD3+、CD3+CD4+和CD3+CD8+淋巴细胞比率变化规律与十二指肠相似均在不同程度上低于对照组。
　　实时荧光定量PCR结果显示试验期间，AFB1组回肠的IL-2，IL-4，IL-6和TNF-αmRNA表达量均较对照组显著降低(p＜0.05或p＜0.01)（7日龄IL-2除外），而十二指肠和空肠的mRNA表达量仅在试验第14和21日龄显著降低(p＜0.05或p＜0.01)。与对照组相比AFB1组的IL-10 mRNA表达量仅在各个肠段21日龄和回肠的14日龄显著降低(p＜0.05或p＜0.01)。AFB1组的IL-17 mRNA表达量则在14和21日龄的十二指肠和回肠以及试验期间的空肠显著低于对照组（p＜0.05或p＜0.01）。AFB1组的IFN-γmRNA表达量在试验期间的十二指肠，21日龄的空肠以及14和21日龄的回肠显著低于(p＜0.05或p＜0.01)对照组。
　　试验期间，AFB1组的plgR、IgM、IgA和IgG mRNA相对表达量在十二指肠，空肠和回肠显著低于对照组(p＜0.05或p＜0.01)（除7和14日龄十二指肠的IgAmRNA，7日龄空肠的IgA mRNA;7日龄十二指肠和空肠的pIgR和IgM mRNA;7和14日龄十二指肠的IgG mRNA和7日龄回肠的IgG mRNA以外）。
　　免疫组化检测结果显示AFB1组的IgA+细胞在试验14和21日龄在十二指肠，空肠和回肠均显著低于对照组(p＜0.05或p＜0.01)。
　　结果表明:日粮中含有0.6mg/kg AFB1可致雏鸡生长发育受阻，引起十二指肠、空肠和回肠病理性损伤，IgA+细胞和IgA，plgR，IgM和IgG mRNA的表达下降，T细胞亚群（CD3+、CD3+CD4+和CD3+CD8+）含量改变以及免疫相关细胞因子(IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17、IFN-γ和TNF-α) mRNA表达减少，从而损伤小肠黏膜免疫功能。

目录

声明

摘要

英文缩略词及中英文对照

1、文献综述

1．1 黄曲霉毒素B1

1．1．1 AFB1的生物特性

1．1．2 AFB1的吸收与代谢

1．1．3 AFB1中毒

1．2 AFB1对机体的影响

1．2．1 AFB1对生长性能的影响

1．2．2 AFB1对胃肠道的影响

1．2．3 AFB1对机体免疫的影响

1．2．4 AFB1对机体其他影响

1．3 肠道黏膜免疫

1．3．1 肠道组织结构

1．3．2 肠道黏液屏障

1．3．3 肠道机械屏障

1．3．4 肠道粘膜免疫屏障

1．3．5 肠黏膜生态屏障

1．4 AFB1与肠道黏膜免疫

2 立题依据、研究目的、技术路线及研究内容

2．1 立题依据及研究意义

2．2 研究内容

2．3 技术路线

3 材料与方法

3．1 试验材料

3．1．1 实验动物

3．1．2 试验日粮

3．1．3 主要试剂和仪器

3．2 试验方法

3．2．1 动物分组及饲养管理

3．2．2 临床观察

3．2．3 病理学观察

3．2．4 小肠T淋巴细胞亚群的测定

3．2．5 小肠黏膜细胞因子测定

3．2．6 小肠黏膜免疫球蛋白测定

3．3 数据处理

4 结果

4．1 临床观察

4．2 病理学观察

4．2．1 常规形态学指数

4．2．2 病理组织学

4．2．3 杯状细胞变化

4．2．4 超微结构的变化

4．3 小肠T淋巴细胞亚群

4．3．1 小肠上皮内T淋巴细胞亚群

4．3．2 小肠固有层T淋巴细胞亚群

4．4 小肠黏膜细胞因子mRNA表达水平

4．5 免疫球蛋白

4．5．1 免疫球蛋白相关因子mRNA表达水平

4．5．2 免疫组织化学

5 讨论

5．1 AFB1对小肠生长发育及形态学的影响

5．2 AFB1对小肠T淋巴细胞亚群的影响

5．3 AFB1对小肠细胞因子表达的影响

5．4 AFB1对小肠IgA+及免疫球蛋白相关因子的影响

6 小结与创新点

6．1 小结

6．2 创新点

参考文献

致谢

硕士期间发表论文