肥胖对鼻内滴注大肠杆菌致小鼠肺脏炎症的影响研究

摘要

通过向高脂饲料诱导的肥胖小鼠鼻内滴注不同数量大肠杆菌，旨在探讨肥胖对机体免疫调控及局部组织防御状态的影响，为后期开展肥胖对机体免疫功能的研究提供一定的理论依据。
　　(1)将30只24-25日龄的昆明雄鼠随机分为:10只饲喂常规饲料作为正常组(ND组)，20只饲喂高脂饲料作为高脂组（HD组），连续饲喂8周后，检测小鼠血清中抵抗素、葡萄糖、胰岛素浓度、肺泡灌洗液(BALF)中白细胞数量和肺组织形态学变化。结果显示，8周后，HD组小鼠体重、附睾脂肪量、血糖、血清胰岛素、RETN浓度、Lee's指数、BALF中WBC、GRA、LYM、MID数量均显著高于ND组，支气管和肺泡周围炎性细胞浸润较ND组明显增加。
　　(2)取肥胖与非肥胖小鼠各32只，肥胖小鼠分为:A（6只）、B（20只）、C（6只）组，非肥胖小鼠分为:D（6只）、E（20只）、F（6只）组。A、D组鼻内滴注40μL浓度为1×108 CFU/μL大肠杆菌菌液，B、E组鼻内滴注40μL1×109 CFU/μL大肠杆菌菌液，C、F组鼻内滴注40μL生理盐水。24h后，每组取6只小鼠，采集肺脏，进行大肠杆菌计数、观察病理形态。结果显示，大肠杆菌滴鼻后，A、B、D、E组小鼠出现了典型的呼吸道感染症状，其中A、D组无死亡，B、E组死亡率分别为25％和10％;肺脏中大肠杆菌数量比较，A组显著高于D组，B、E组无显著性差异;各试验组小鼠肺脏均出现了不同程度的充血出血、炎性细胞浸润等病理变化，且A组损伤大于D组，B组大于E组。
　　(3)将180只肥胖小鼠分为:0h（6只）、Ⅰ（42只）、Ⅲ（90只）、Ⅴ（42只）组，150只非肥胖小鼠分为:0h（6只）、Ⅱ（42只）、Ⅳ（60只）、Ⅵ（42只）组。0h不做任何处理，Ⅰ、Ⅱ组鼻内滴注40μL1×108 CFU/μL的大肠杆菌菌液，Ⅲ、Ⅳ组鼻内滴注40μL1×109 CFU/μL的大肠杆菌菌液，Ⅴ、Ⅵ组鼻内滴注40μL生理盐水。于0h和感染后2、6、12、24、48、72、96h，各组随机选取6只小鼠，采集检测血液和BALF中白细胞数量，血清和肺组织中的细胞因子浓度，观察肺脏组织病理学变化。大肠杆菌滴鼻后，结果显示:①Ⅰ、Ⅱ组血液中WBC先升高，后降低，在24h降至最低，随后逐渐升高;Ⅲ、Ⅳ组WBC在2h时降低，后逐渐升高再降低，至48h时降至最低后稍有回升;②各组小鼠血清中TNF-α、IL-6、IL-10、RETN迅速升高并维持至48h后逐渐降低;24h内的细胞因子，Ⅰ组显著高于Ⅱ组、Ⅲ组显著高于Ⅳ组;96h时，Ⅰ组IL-10和RETN显著低于Ⅱ组，Ⅲ组IL-6、IL-10显著高于Ⅳ组。③各组小鼠BALF中WBC、GRA、LYM、MID迅速增加，至24h达到峰值后急剧下降;整个试验期间，Ⅰ组白细胞数量高于Ⅱ组，Ⅲ组高于Ⅳ组。④各组小鼠肺脏中的RETN、TNF-α、IL-6、IL-8、IL-10、MIP-2、IL-12和MCP-1先略降低，后在24h或48h升至峰值后下降;肺脏中检测的细胞因子比较，整个试验期间，Ⅲ组高于Ⅳ组;72h内，Ⅰ组高于Ⅱ组;至96h，Ⅰ组TNF-α、IL-10、IL-12显著低于Ⅱ组，而MIP-2和IL-6显著高于Ⅱ组。⑤各组小鼠的肺脏出现了不同程度的充血出血、炎性浸润等病理变化，随后炎症消散，组织结构清晰。6h和24h时，Ⅰ组较Ⅱ组、Ⅲ组较Ⅳ组，肺脏中炎性细胞浸润更多，组织损伤更明显;96h时，Ⅱ组较Ⅰ组、Ⅲ组较Ⅳ组，组织结构更紊乱。
　　结论:1.昆明小鼠通过连续饲喂高脂饲料8周，可成功建立肥胖模型。2.鼻内滴注40μL1×108 CFU/μL的大肠杆菌，成功建立了小鼠非致死性肺部感染模型;滴注40μL1×109 CFU/μL的大肠杆菌，建立了昆明小鼠致死性肺部感染模型。3.肥胖提高了机体对病原菌刺激的敏感性，促进了非致死性感染小鼠肺脏的炎症消散和组织结构修复，却加剧了致死性感染小鼠肺部的炎性损伤，抑制肺脏结构与功能的恢复，延长了机体的痊愈时间。

目录

声明

论文说明

摘要

缩略词表

第一章 文献综述

1 肥胖对呼吸系统疾病的影响

2 肥胖影响呼吸系统抗感染的机制

2．1 机械因素

2．2 生物因素

3 大肠杆菌感染呼吸系统的研究进展

4 研究目的与意义

第二章 高脂诱导昆明小鼠肥胖模型的建立及其对肺脏的影响

1 材料和方法

1．1 试验动物

1．2 饲料配方

1．3 主要仪器和试剂

1．4 小鼠营养性肥胖模型的建立

1．5 样本采集和指标检测

1．6 数据分析

2 结果

2．1 各组小鼠的体质量变化

2．2 小鼠存活和成模情况

2．3 小鼠肥胖相关指标的比较

2．4 高脂饮食对气道炎症的影响

2．5 高脂饮食对肺组织炎症的影响

3 讨论

4 小结

第三章 肥胖昆明小鼠肺部感染模型的建立

1 材料和方法

1．1 试验菌株及菌液配制

1．2 试验动物

1．3 主要试剂和仪器

1．4 试验动物分组与处理

1．5 检测指标及方法

1．6 数据分析

2 结果

2．1 小鼠感染大肠杆菌后的临床症状

2．2 小鼠感染大肠杆菌后的死亡情况

2．4 感染小鼠肺组织中大肠杆菌计数

2．5 滴鼻大肠杆菌小鼠肺组织的病理形态学变化

3 讨论

4 小结

第四章 肥胖对昆明小鼠鼻内滴注大肠杆菌感染的影响

第一节 肥胖对鼻内滴注大肠杆菌小鼠血液白细胞及炎症细胞因子的影响

1 试验材料与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

第二节 肥胖对鼻内滴注大肠杆菌小鼠肺脏细胞因子及组织形态学的影响

1 材料和方法

2 结果

3 讨论

4 小结

结论

参考文献

致谢

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