1，8-桉油素体外杀螨活性及其作用机理的研究

摘要

桉油为桃金娘科植物蓝按（Eucalyptus globulus Labill.）、樟科植物樟(Cinnamomum camphora(L.) Sieb.)或上述两科同属其他植物经水蒸气蒸镏得到的挥发油。桉油具有抑菌（真菌和细菌）、杀虫、镇痛抗炎、抗氧化和抗癌等药理活性。1，8-桉油素(1，8-cineole)，又称桉油精，是桉油的主要有效成分，含量为58.55％。为缓解目前抗寄生虫药物的生物毒性、耐药性等弊端，寻找新的抗兔疥螨（Sarcoptesscabiei var.cuniculi）药物，本课题对1，8-桉油素的杀螨活性进行测定，并通过形态学及测定虫体内各种酶活性的变化，初步评价1,8-桉油素的杀螨机理。主要研究结果如下:
　　1.1,8-棱油素的体外抗疥螨活性测定:采用离体浸杀的方法，评价1，8-桉油素的体外抗疥螨活性并测定其抗兔疥螨的半数致死浓度(Lethal Concentration of50％，LC50)帮半数致死时间(Lethal Temperature of50％，LT50)。结果显示:1，8-桉油素在12h的LC50为2.77 mg/mL，当1，8-桉油素浓度为9.2 mg/mL、4.6 mg/mL、2.3 mg/mL时，其LT50分别为3.606 h、7.416 h、11.296 h。以上结果表明，1，8-桉油素具有较好的杀螨活性，其作用效果呈现一定的浓度依耐性。
　　2.1，8-桉油素对兔疥螨形态学的影响:用浓度为2.3 mg/mL、4.6 mg/mL、9.2mg/mL的1，8-桉油素处理兔疥螨，在光学显微镜下观察幼螨的运动情况，并制作超薄切片，研究药物对疥螨虫体超微结构的影响。结果表明:在光学显微镜下，用药活的开始不停地急剧运动，兴奋异常;一段时间后虫体扩散逃逸，发现大量虫卵;最后虫体收缩变小、死亡。超微电镜下，正常组虫体皮肤层具有规律性的条纹，体腔细胞完整;用药组虫体皮肤层变得无规律，体腔细胞细胞膜溶解，线粒体空泡化，细胞核溶解消失。由此可知，1，8-桉油素可麓主要通过影响虫体的吞噬系统、能量代谢系统和神经系统，最终导致虫体死亡。
　　3.1，8-桉油素对兔疥螨酶活性的影响:以浓度为9.2 mg/mL、4.6 mg/mL、2.3mg/mL的1，8-桉油素作为实验组，液体石蜡作为空白对照组处理兔疥螨，分别在4h、8h和12h采集虫体提取酶原液，分别测定超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、谷胱甘肽S-转移酶(glutathione-s-transferases，GSTs)、单胺氧化酶(monoamine oxidase，MAO)、Ca2+-ATP酶(Ca2+-ATPase)、乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase，AchE)和一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)的活性。结果表明:
　　保护酶类的酶活性的变化:在12h内，不同浓度的1，8-桉油素处理疥螨虫体后，虫体的SOD酶活性均升高，其中，1，8-桉油素浓度处理虫体4h时，SOD升离率最高为43.83％;1，8-桉油素处理虫体12h时，SOD升高率最低为6.11％。结果表明1，8-桉油素能够诱导疥螨虫体SOD活性的升高。
　　防御酶类的酶活性的变化:在12h内，不同浓度的1，8-桉油素处理疥螨虫体后，虫体麴GSTs酶活性均升高，其中，1，8-按油素处理12h时GSTs活性升高率最高为684.02％;处理4h时GSTs活性升高率最低为41.10％。结果表明1，8-桉油素能够激活虫体的防御系统，诱导GSTs活性升高，降低1，8-桉油素对机体的损伤。
　　神经传递酶类的酶活性的变化:在12 h内，不同浓度的1，8-桉油素处理疥螨虫体后，虫体的MAO酶活性均升高，其中1，8-桉油素处理4h时MAO活性升高率最高为244.73％;处理12 h时MAO活性升高率最低为17.99％。结果表明1，8-桉油素能够升高MAO活性，导致神经传递加快，引起虫体兴奋异常。
　　在0～8 h，不同浓度的1，8-桉油素处理疥螨虫体后，虫体的Ca2+-ATPase的活性升高;在12h，虫体的Ca2+-ATPase的活性是被抑制的。结果表明在1，8-桉油素作用前期，虫体兴奋异常，急剧运动，消耗大量ATP.随着药物作用时间的延长，虫体逐渐趋于死亡，机体对ATP的需求减少，酶活性降低。
　　神经效应酶类的酶活性的变化:在12 h内，不同浓度的1，8-桉油素处理疥螨虫体后，虫体的AChE酶活性均被抑制，浓度为9.2 mg/mL时AChE酶活性抑制率最大为65.52％，浓度为2.3 mg/mL时抑制率最小为10.87％。结果表明1，8-桉油素能够抑制AchE活性，引起虫体突触间隙乙酰胆碱(Ach)积累，导致虫体持续兴奋，且1，8-桉油素浓度越高，酶活性的抑制率越高。
　　在12h内，用不同浓度1，8-桉油素处理兔疥螨，当1，8-按油素浓度为9.2 mg/mL时，NOS的活性被抑制，抑制率最高为52.98％;当1，8-桉油素浓度为4.6 mg/mL和2.3 mg/mL时，NOS的活性升高，升高率最高为269.12％。结果表明1，8-桉油素对疥螨NOS活性呈现高浓度抑制、低浓度促进的作用。
　　通过对1，8-按油素的杀螨活性的测定、形态学的观察和疥螨虫体酶活性的测定，研究结果表明1，8-桉油素主要通过影响疥螨体内跟神经信号传导有关的Ca2+-ATPase和NOS的活性，引起虫体过度兴奋而死亡。

目录

声明

摘要

缩略词表

第一章 文献综述及研究目的与意义

1 文献综述

1．1 桉油的来源

1．2 桉油的药理研究概况

1．3 寄生虫体内生物酶的特性

2 研究目的及意义

2．1 研究目的

2．2 实验流程图

第二章 1，8-桉油素体外杀螨活性研究

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 方法

2 结果

2．1 疥螨幼虫的鉴定

2．2 半数致死浓度的测定

2．3 半数致死时间测定

3 分析与讨论

4 小结

第三章 1，8-桉叶油素对疥螨形态学的影响

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 方法

2 结果

2．1 1，8-桉油素杀螨症状观察

2．2 1，8-桉油素体外杀螨的超微结构观察

3 分析与讨论

3．1 1，8-桉油素杀螨症状观察

3．2 透射电镜观察1，8-桉油素对疥螨幼虫的超微结构影响

4 小结

第四章 1，8-桉叶油素对疥螨体内保护酶的影响

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 方法

1．3 数据处理

2 结果

3 分析与讨论

4 小结

第五章 1，8-桉叶油素对疥螨体内解毒酶的影响

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 方法

1．3 数据处理

2 结果

3 分析与讨论

4 小结

第六章 1，8-桉叶油素对疥螨体内神经传递酶类的影响

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 方法

1．3 数据处理

2 结果

2．1 MAO测量结果

2．1 Ca2+-ATPase测量结果

3 分析与讨论

3．1 1，8-桉油素对兔疥螨幼虫MAO活性的影响

3．2 1，8-桉油素对兔疥螨幼虫Ca2+-ATPase活性的影响

4 小结

第七章 1，8-枝叶油素对疥螨体内神经效应酶类的影响

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 方法

1．3 数据处理

2 结果

2．1 AChE活性测量结果

2．2 NOS活性测量结果

3 讨论与分析

3．1 1，8-桉油素对兔疥螨幼虫Ache活性的影响

3．2 1，8-桉油素对兔疥螨幼虫NOS活性的影响

4 小结

第八章 结论与创新

1 结论

2 创新

参考文献

致谢

附图