五倍子口服液的制备及其对小鼠分泌性腹泻的效果观察

摘要

五倍子富含鞣质，具有“涩肠止泻”的功效，常用兽用五倍子制剂主要为五倍子散和大黄五倍子散，二者均用于水生动物疾病。本研究针对五倍子的“涩肠止泻”功效，以五倍子鞣质提取物作为原料药物，制备口服溶液，研究其对小鼠分泌性腹泻的药理活性，为将其开发为抗腹泻中兽药奠定基础。主要研究内容及结果如下:
　　1.五倍子口服液的制备
　　用水提法提取药液、纯化、冷冻干燥后得到五倍子鞣质提取物粉末，并对其进行了鞣质含量测定。五倍子口服液由上述提取物粉末和筛选后的适量辅料制成，并对其进行了稳定性评价，加速、长期稳定性试验测定鞣质含量及溶液pH。
　　结果表明，五倍子提取物中鞣质含量为47.75％;通过正交试验确定每100mL五倍子口服液最优配方为:五倍子鞣质提取物15g，苯甲酸0.25g，尼泊金乙酯0.05g，焦亚硫酸钠0.2g，蔗糖4g，加纯化水至100mL。制备方法为:将纯化水煮沸除氧，放冷备用;15g五倍子鞣质提取物溶于上述纯化水，搅拌使其充分溶解;加入辅料，定容即可。最终药液颜色为棕黄色，色泽澄明，鞣质含量应不低于60mg/mL，稳定性试验结果显示，试验期间药物pH与最初药物pH（3.3±0.1）相差保持在0.2个单位以内，于40±2℃和25±2℃条件下分别存放6个月和12个月后，符合最初设定标准。
　　2.五倍子口服液体内外抑菌活性研究
　　测定五倍子口服液对不同大肠杆菌的最小抑菌浓度(Minimum Inhibitory Concentration，MIC)及其最小杀菌浓度(Minimum Bactericidal Concentration，MBC)，评价其体外抑菌作用;体外抑菌试验结果显示，五倍子口服液对4种大肠杆菌的MIC分别为1.17mg/mL和2.34mg/mL，MBC均为9.38mg/mL。
　　ICR雄性小鼠(18-22g)分为6组，每组21只，试验前3天每天固定时间灌服药液，设置空白对照组、模型组、药物对照组（洛哌丁胺）、五倍子口服液高中低三个剂量组，第3天给药后，腹腔注射感染LD50量大肠杆菌(CVCC3749，O101)，于16h后确定动物死亡数量，每组随机选取未死亡小鼠5只，采样。剩余试验鼠继续灌药观察至第7天，采样。测定小鼠肝、脾及肠道脏器指数，7天体重变化情况、肠道菌群、结肠病理学变化及细胞因子和免疫球蛋白水平等指标，评价五倍子口服液体内抗大肠杆菌感染作用，记录总存活率（不包括处死小鼠）。
　　体内抗感染试验结果显示，药物组存活率（除去处死数量）均高于50％，说明五倍子口服液对于大肠杆菌感染具有一定的抵抗力;其中脏器指数结果表明，高剂量组肠道分泌物减少量相较于模型组差异显著(P＜0.01)，且效果与洛哌丁胺相当(P＞0.05)。五倍子口服液组各剂量组的免疫球蛋白G(IgG)水平显著高于模型组(P＜0.01)，中高剂量组分泌型免疫球蛋白A(SIgA)水平显著高于模型组(P＜0.01)，略高于空白组，说明五倍子口服液具有免疫增强作用。对于促炎因子的分泌具有抑制作用（P＜0.01或P＜0.05），而对抗炎因子具有一定的促进作用（P＜0.01或P＜0.05），说明五倍子口服液具有一定抗炎作用。此外，在肠道菌群紊乱的情况下，五倍子对于肠道益生菌的生长具有一定的促进作用(P＜0.01或P＜0.05)。结肠病理学检查结果显示GOS对大肠杆菌感染所致的小鼠结肠组织病理性结构变化有一定的抵抗力，且能改善大肠杆菌感染所致的小鼠结肠组织病理性结构变化。
　　3.五倍子口服液对小鼠分泌性腹泻模型的效果观察
　　ICR雄性小鼠(18-22g)分为6组，每组5只，除空白对照组外，模型组，五倍子口服液低、中、高剂量组（药物组），阳性对照组（洛哌丁胺）均在灌胃30min后建立小鼠蓖麻油腹泻模型，评价五倍子口服液对腹泻抑制作用和肠道分泌及推进的影响。
　　腹泻抑制、肠道积液分泌和肠推进试验结果显示，与模型组比较，药物组对蓖麻油引起的小鼠腹泻、肠道积液分泌增加和肠推进速度加快均具有显著抑制作用（P＜0.01或P＜0.05），且药物组与阳性对照组相比无显著性差异(P＞0.05)，表明五倍子口服液在治疗由蓖麻油引起的小鼠腹泻、肠道积液分泌增加和肠推进速度加快上与洛哌丁胺具有疗效相当。
　　本研究制备的五倍子口服液质量和稳定性符合要求，具有较好的体内外抑菌活性，其体内抑菌作用主要表现为抗炎、增强免疫功能、促进益生菌生长、调节肠道菌群、缓解和改善结肠病理变化等，对由蓖麻油引起的小鼠腹泻、肠道积液分泌增加和肠推进速度与洛哌丁胺的疗效相当。

目录

声明

摘要

缩略词表

第一章文献综述及研究的目的

1．1腹泻的类型

1．2分泌性腹泻的主要诱发原因

1．3分泌性腹泻的治疗方法及常用药物

1．4中药治疗腹泻及口服溶液剂概况

1．5五倍子研究概况

2研究的目的及意义

第二章五倍子口服液的制备

1材料

1．1药品与试剂

1．2试验菌种

1．3主要试验仪器

2试验方法

2．1五倍子鞣质提取物粉末的制备

2．2辅料的筛选及制备工艺的确定

2．3五倍子口服液的稳定性研究

2．4数据处理

3结果与分析

3．1鞣质提取物含量测定

3．2正交试验确定最优制备工艺

3．3五倍子口服液的稳定性研究

4讨论与结论

4．1讨论

4．2结论

第三章五倍子口服液体内外抑菌活性研究

1材料

1．1药品与试剂

1．2菌种

1．3试验动物

1．4主要试验仪器

2试验方法

2．1 MIC、MBC值的测定

2．2五倍子口服液体内抗大肠杆菌感染作用

2．3数据处理

3结果与分析

3．1体外抑菌作用

3．2五倍子口服液对大肠杆菌感染小鼠的影响

4讨论与结论

4．1讨论

4．2结论

第四章五倍子口服液对小鼠分泌性腹泻模型的效果观察

2．1五倍子口服液对蓖麻油所致腹泻的抵抗能力

2．2五倍子口服液对蓖麻油腹泻的机理研究

2．3数据处理

3结果与分析

3．1抑制腹泻的总体效果

3．2小肠肠道积液的变化情况

3．3对肠道运动的影响

4讨论与结论

4．1讨论

4．2结论

第五章结论与创新

1结论

2创新

参考文献

致谢

附录

作者简历