玉帘凝集素的分离纯化、部分性质研究及分子克隆

摘要

该文对玉帘凝集素(Zephyranthes candida Herb Agglutinin,ZCA)的研究分为两个部分.第一部分为ZCA的分离纯化及部分性质研究;第二部分为ZCA的分子克隆及序列分析.荧光淬火研究表明CsCl可以淬灭71﹪色氨酸的荧光,化学修饰实验表明N-溴代丁二酰亚胺(NBS)修饰色氨酸和2,3-丁二酮修饰精氨酸后,ZCA凝血活性明显下降,Ser/Thr被修饰后,凝血活性无明显变化.ZCA抗病毒实验结果表明,ZCA溶液在浓度为500μg/ml时无细胞毒性,浓度为5μg/ml以上时有抗HSV-II活性,IC<,50>=5-10μg/ml之间.使用ABI491A蛋白测序仪测定ZCA的N-端和C-端部分序列显示,N-末端前15个氨基酸的序列为:D-S-I-L-Y-S-G-E-T-L-S-A-G-Q-S,C-末端7个氨基酸残基的序列为:G-T-A-W-K-A-P.与石蒜科其它甘露糖结合凝集素序列进行比较,发现有较高的同源性.

目录

前言

第一部分玉帘凝集素的分离纯化和部分性质研究

1 材料、试剂和仪器

2 方法

2.1玉帘凝集素(ZCA)的分离纯化

2.2 ZCA抗病毒活性的测定

2.3 ZCA部分基团的化学修饰

2.4糖抑制实验

2.5 ZCA荧光光谱分析

2.6 ZCA对大肠杆菌的凝集活性

2.7 ZCA对酵母细胞的凝集作用

3结果与讨论

3.1 ZCA的分离纯化

3.2 ZCA的性质测定结果

3.3玉帘凝集素(ZCA)的N-端和C-末端部分序列测定

4结论

第二部分玉帘凝集素的基因克隆及序列分析

1材料和方法

1.1材料与试剂

1.2方法

2结果和分析

2.1总RNA和DNA的提取

2.2玉帘凝集素(ZCA)cDNA基因全长的扩增与克隆

2.3玉帘凝集素(ZCA)基因组基因的克隆

2.4 ZCA基因全长核苷酸序列及其分析

2.5 ZCA推测出的氨基酸序列及其分析

3结论

参考文献

文献综述凝集素研究进展

1前言

2凝集素的分类

2.1微生物凝集素

2.2植物凝集素

2.3动物凝集素

3凝集素的结构

4凝集素的特性

5凝集素的应用

6研究展望

综述参考文献

研究生期间发表的论文

声明

致谢