绿色木霉的筛选与产纤维素酶发酵条件优化及部分酶学性质研究

摘要

从四川乐山井研县收集到的土壤样本中发现了具有纤维素酶活性的微生物,经过选择培养基初筛分离到43株能利用纤维素的菌株,再通过刚果红染色法复筛到4株纤维素分解能力较强的菌株,最后挑选出一株酶活性最高的霉菌,经形态学初步鉴定为木霉属绿色木霉(Trichoderma viride).对分离到的菌株进行液态发酵,并对产酶发酵条件作了优化.对所分离到的绿色木霉纤维素酶发酵液当中的内切葡聚糖酶组分进行了进一步分离提纯工作.从中分离到一种具有单一内切葡聚糖酶活性的酶组分,能够降解羧甲基纤维素钠,但对结晶度高的脱脂棉及微晶纤维素没有活性.对纯化到的内切葡聚糖酶的基本酶学性质进行了研究.SDS-PAGE显示该酶为单亚基单体蛋白,并测得其相对分子量为59.2KD.等电聚焦法测得该酶的PI为6.2左右,动力学方法测得该酶对最适底物CMC的Km值为4.86×10<'-2>g/ml.该酶的最适pH为5.0,在pH4~6有较强的稳定性;最适反应温度为50℃,有一定的热稳定性,65℃下能长时间保持较高活性.测定不同价态金属离子对酶活性的影响,在离子浓度为1mmol/L的条件下,Cu<'2+>,Mn<'2+>,Ca<'2+>对酶活有明显促进作用,其中Cu<'2+>的促进作用最强,使酶活增加50﹪左右;而Hg<'2+>,Ag<'+>,Cd<'2+>,K<'+>,Ba<'2+>对该酶有不同程度的抑制作用,孵育30min,Hg<'2+>几乎使酶丧失了全部活性.

目录

1引言

2材料、试剂和仪器

2.1材料

2.2试剂

2.3仪器

3实验方法

3.1蛋白质浓度的测定

3.2酶活性的测定

3.3菌种的筛选

3.4产酶(CMCase为主）发酵条件的优化

3.5部分酶组分的分离提纯

3.6纯度鉴定

3.7基本酶学性质的分析

3.8部分金属离子对酶活性的影响

4实验结果

4.1菌种筛选

4.2菌种鉴定

4.3发酵条件优化

4.4内切葡聚糖酶组分的提纯

4.5基本酶学性质研究

4.6 不同金属离子对酶活性的影响

5讨论

参考文献

论文综述：纤维素酶研究进展

一 引言

二纤维素酶的来源

三 纤维素酶的分类

四 纤维素酶的理化性质

五 纤维素酶的分子结构与功能

六 纤维素酶的作用机理

七、纤维素酶的基因表达与分子克隆

八 纤维素酶的应用

综述参考文献

致谢

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