版纳微型猪近交系骨髓间充质干细胞永生细胞系的构建和免疫调节研究

摘要

背景和目的:版纳微型猪近交系(banna mini-pig inbred-line,BMI)已近交繁育到第20世代,为世界唯一育成的近交系大动物,是异种移植中很有希望的供器官源.此近交系猪来源的MSCs在干细胞治疗的基础和临床研究中尤有价值.然而,MSCs的衰老和有限的增殖能力限制了它在体外的大量增殖及对其生物学特征的深入理解,从而阻碍了其在临床和实验体系中的应用,建立成体MSCs永生细胞系迫在眉睫.有文献报道,表达猴病毒40(simian virus 40,SV40)大T抗原足以使某些体细胞和干细胞逃避衰老而永生化,因此该研究旨在(1)通过转基因技术将SV40抗衰老基因导入BMI-MSCs,构建永生细胞系,并鉴定永生化MSCs干细胞形态和生长特性,特异抗原表达,多向分化潜能和致瘤性,探讨其在移植和材料生物相容性评价中的应用前景.(2)应用单向淋巴细胞混合培养模型,系统研究永生化BMI-MSCs对异种T淋巴细胞增殖的免疫原及免疫调节特性,初步探讨了其免疫抑制的分子机制,展望其在免疫调节和创伤修复中的应用前景.结论:此研究首次构建了近交系猪的MSCs永生细胞系,不仅可为基础或临床研究提供稳定,安全,可靠的干细胞来源,还能为材料生物相容性评价提供标准细胞模型.该研究建立的永生化BMI-MSCs对异种T淋巴细胞表现出的低免疫原和免疫调节特性与Nicola和Krampera报道的MSCs对同种异体T淋巴细胞的作用一致.提示MSCs可用于异种移植,在造血干细胞和实体器官移植中充当免疫调节剂.

目录

前言

1版纳微型猪近交系间充质干细胞永生细胞系的建立

1.1材料与方法

1.1.1动物

1.1.2材料与试剂

1.1.3仪器及设备

1.1.4方法

1.2结果

1.2.1原代BMI-MSCs的分离和鉴定

1.2.2转基因BMI-MSCs的构建和筛选

1.2.3转基因MSCs永生性分析

1.2.4流式分析

1.2.5核型分析

1.2.6致瘤性鉴定

1.2.7转基因永生化对干细胞特征的影响

1.3讨论

1.3.1成体干细胞的衰老与永生

1.3.2永生化BMI-MSCs与材料生物相容性评价

1.4小结

2永生化BMI-MSCs对hPBLs增殖的抑制效应及分子机制初探

2.1材料与方法

2.1.1材料与试剂

2.1.2仪器与设备

2.1.3方法

2.2结果

2.2.1永生化BMI-MSCs对hPBLs的刺激效应

2.2.2永生化BMI-MSCs对hPBLs的免疫调节作用

2.2.3 FasL和TGF-D1在MSCs免疫抑制中的作用

2.2.4 BMI-MSCs FasL和TGF-β1的表达

2.2.5细胞-细胞接触对抑制效应的影响

2.2.6MSCS加入时间对抑制效应的影响

2.3讨论

2.3.1永生化BMI-MSCs的低免疫原性

2.3.2永生化BMI-MSCs对异种T细胞增殖的免疫调节及分子机制

2.3.3 MSCs免疫调节作用的应用前景

2.3.4MTS法

2.4小结

全文总结

综述间充质干细胞的生物学特征及应用研究进展

1概述

1.1 MSCs的分离培养

1.2 MSCs的表面分子

1.3间充质干细胞的体外分化

1.4间充质干细胞的永生化

2 MSCs的免疫学特征

2.1 MSCs的免疫原性

2.2 MSCs对淋巴细胞增殖的抑制作用

3.细胞-宿主的界面反应

3.1.移植物和宿主的免疫反应

3.2细胞的移入

3.3植入细胞在体内的分化

4 MSCs移植在疾病治疗中的研究进展

4.1骨和软骨修复

4.2心血管修复

4.3神经系统功能恢复

4.4治疗肌肉萎缩症

4.5抗纤维化

4.6免疫调节

5结论

参考文献

致谢

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