人血管内皮生长因子受体2胞外段在毕赤氏巴斯德酵母中的表达

摘要

探讨在毕赤氏巴斯德酵母(Pichiapastoris)中高效表达有真核蛋白结构的人血管内皮生长因子受体2胞外段(heVEGFR2)的可行性。方法从重组质粒pORF-beVEGFR2经PCR获heVEGFR2DNA全长，构建重组毕赤氏巴斯德酵母分泌性表达载体(pPICZA-heVEGFR2)，电转化PichiapastorisX-33。用抗药性表型和甲醇诱导筛选出重组蛋白表达阳性的转化X-33。 结果SDS-PAGE显示，获分子量约108KD的重组蛋白，约占分泌表达蛋白的45％。该重组蛋白在表达上清中的浓度可达80mg/L以上。其heVEGFR2部分分子量约106.4KD，接近用昆虫细胞表达的重组人sKDR非融合蛋白116KD的分子量。Westernblot证实，该蛋白能特异地与抗VEGFR2单克隆抗体结合。 结论Pichiapastoris能高效表达有真核蛋白结构的heVEGFR2蛋白全段。

目录

声明

前言

实验中所用的技术路线

1.材料和方法

2 实验结果

3 讨论

4 结论

参考文献

文献综述:以VEGF及其受体为靶点的肿瘤抗血管生长治疗研究与巴斯德毕赤氏酵母(Pichia Pastoris)表达系统

参考文献

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