MCM2检测细胞增殖性在结直肠肿瘤诊断中的应用研究

摘要

[目的]1探索大肠癌、大肠腺瘤及正常大肠粘膜组织中MCM2的分布表达情况。2利用Realtime-PCR技术精确定量MCM2-mRNA在大肠癌及大肠腺瘤组织、正常大肠粘膜组织中的表达差异，为进一步细致分析结直肠细胞不同突变阶段MCM2的表达，打下实验基础。 [方法]150例大肠癌组织、大肠腺瘤及正常组织分别选取自四川大学华西医院胃肠外科2004年9月-2004年12月手术患者及门诊纤维肠镜患者，其中癌12例、腺瘤33例、正常组织5例，术后均经病理证实，组织标本实时保存于-150℃冰箱内。2免疫组织化学(ImmunohistochemistyIHC)：根据抗原抗体特异性结合反应，采用羊抗人MCM2抗体，通过免疫组织化学方法，从蛋白水平定位检测大肠腺癌、大肠腺瘤及正常大肠粘膜组织中MCM2抗原的存在及表达部位。3荧光定量PCR(RealtimequantitativePCR)：定量检测大肠腺瘤、大肠腺癌及正常大肠粘膜中MCM2-mRNA的表达，Trizol试剂分别从大肠腺癌、大肠腺瘤及大肠粘膜正常组织中提取总RNA，用MCM2的特异引物;上游引物：5’-CACATCGAGTCCATGATCC-3’下游引物：5’-CAAAAGTCTTGCGCATGCT-3’进行逆转录聚合酶链式反应，从mRNA水平定量检测MCM2在大肠腺瘤及大肠腺癌、正常大肠粘膜组织中的表达差异。 [结果]1免疫组织化学方法可见在正常大肠粘膜组织中MCM2棕黄色信号颗粒表达在腺泡凹底部的1/3至1/2部分，在腺泡的顶部则无表达，而在大肠腺瘤及大肠癌组织则呈全层腺泡上皮的表达，大肠腺瘤及大肠癌组织中MCM2表达部位并无差异性。2通过Realtime-PCR方法(45个循环)从大肠癌及大肠腺瘤组织中检测到160bp目的基因片段，但两者表达的量有差异，大肠腺癌组表达均数为(X=31.5833)而大肠腺瘤组均数为(X=16.6061)经统计学分析MCM2在两者表达量的差异有统计学意义(P=0.004P＜0.05)。 [结论]1增殖特异性抗原MCM2在正常大肠粘膜腺上皮表达集中在腺泡的下1/3至1/2部分，与大肠癌及大肠腺瘤组织中MCM2表达的部位不同。2MCM2在大肠癌及大肠腺瘤中腺泡上皮均呈全层表达，但两者在腺泡上皮表达的量有差异，从而为进一步利用定量检测腺瘤和大肠腺癌中MCM2表达差异，来排除大肠腺瘤恶变或评估其恶变可能提供了实验基础，增强MCM2作为结直肠癌早期筛查诊断标记物的实用性的有效性。

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结论

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综述MCM检测细胞增殖性在结直肠肿瘤诊断中的应用

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