细胞保护基因在慢性移植肾肾病中的表达及不同免疫抑制剂干预效应的研究

摘要

目的:细胞保护基因是指其表达能够介导抗凋亡和抗炎症反应，从而维护细胞生理功能，保持细胞存活状态的一类基因。目前研究较多且抗凋亡和抗炎症功能较强的细胞保护基因包括A20、HO-1和Bcl-X<,L>。移植肾细胞在多种因素的作用下会发生炎症反应和凋亡，业已证实移植肾细胞的炎症和凋亡过程与慢性移植肾肾病(Chronic Allograft Nephropathy，CAN)的发生、发展有关。通过增强细胞保护基因的表达，从而增强细胞自身保护功能可能有助于保护移植肾的结构和功能，并对其存活产生积极影响。本研究拟通过检测人类和大鼠移植肾CAN标本中上述三种细胞保护基因的表达情况，并观察不同的免疫抑制剂干预对三种细胞保护基因表达的影响，阐明该三种基因在CAN不同阶段的表达情况及不同免疫抑制剂对其表达的影响，从而更加深入地认识CAN的发病机理以及不同免疫抑制剂对CAN发病不同效应的作用机理，为在器官移植临床实践中合理选用免疫抑制剂提供理论依据。 方法:1．采用免疫组化染色技术检测经手术切除或者穿刺活检获得的人类CAN移植肾标本中A20、HO-1和Bcl-X<,L>的表达。2．建立实验动物模型。按照改良Kamada法行SD->Wistar大鼠原位肾脏移植，建立强化缺血再灌注损伤加速大鼠慢性移植肾肾病动物模型。3．实验分组。本研究中动物实验分为两部份：(1)细胞保护基因在CAN时的表达情况研究。本部份实验分为4组，A组：对照组(假手术组，只游离受鼠左肾血管和结扎右肾)；B组：肾移植4周组(于肾移植术后4周处死大鼠，采集标本)；C组：肾移植8周组(于肾移植术后8周处死大鼠，采集标本)；D组：肾移植12周组(于肾移植术后12周处死大鼠，采集标本)。每组大鼠均为8只。除对照组外，其余各实验组的动物在术后均使用CsAl0mg·kg<'-1>·d<'-1>×10d，以避免急性排异反应。(2)不同免疫抑制剂干预对CAN时细胞保护基因表达变化的研究。本部份实验分为5组，对照组；CsA组(6mg·kg<'-1>·d<'-1>)；FK506组(0.15 mg·kg<'-1>·d<'-1>)；MMF组(20mg·kg<'-1>·d<'-1>)；RAPA组(0.8 mg·kg<'-1>·d<'-1>)。每组大鼠均为8只。各组大鼠在肾移植术后均先使用CsA 10 mg·kg<'-1>·d<'-1>×10d，以渡过急性排异反应期。从第11天开始，各组开始应用不同免疫抑制剂进行干预直至移植术后第8周处死动物，收集移植肾标本。对动物实验各组移植肾标本均分别采用免疫组化和实时荧光定量PCR技术检测其中A20、HO-1和Bcl-X<,L>的mRNA和蛋白水平的表达。 结果:(1)通过免疫组化染色技术检测，在人体发生CAN的移植肾标本中可以见到A20的表达，而在正常对照肾组织中，则没有A20的表达；在发生CAN的人体移植肾标本中，绝大多数区域没有HO-1的表达，仅在极少数区域的肾小管上皮细胞有微弱表达，在正常对照肾组织中，没有发现HO-1的表达；在正常人体肾脏和人体发生CAN的移植肾中，均可见到Bcl-X<,L>在肾小球毛细血管内皮细胞和肾小管上皮细胞中表达，但CAN标本中的表达水平明显低于正常肾组织标本(P<0.05)。(2)在大鼠CAN模型中A20、HO-1和Bcl-X<,L>的表达水平和CAN病变的严重程度呈负相关关系。(3)器官移植临床工作中常用的免疫抑制剂CsA、FK506、MMF和RAPA都能增强细胞保护基因A20、HO-1和Bcl-X<,L>在CAN中的表达(P<0.05)。与CsA和FK506相比，MMF和RAPA能更为明显地增强A20的表达(P<0.05)。 结论:人体标本的研究证实了细胞保护基因在CAN中的表达，大鼠CAN模型的研究发现细胞保护基因的表达与CAN的病变严重程度之间呈负相关关系以及免疫抑制剂对A20表达的影响具有差异性，推测这种差异性与免疫抑制剂的作用机理有关。尚需进一步的研究来验证细胞保护基因对移植肾的直接保护作用和探讨免疫抑制剂的确切作用机理。

目录

论文说明：缩略词表

声明

摘要

前言

第一部份细胞保护基因在人类慢性移植肾肾病标本中的表达及其意义

材料与方法

结果

讨论

结论

第二部份细胞保护基因在大鼠慢性移植肾肾病模型中的表达及其意义

材料与方法

结果

讨论

结论

第三部份不同免疫抑制剂对细胞保护基因在大鼠慢性移植肾肾病模型中表达的影响及其意义

材料与方法

结果

讨论

结论

全文总结

参考文献

综述 慢性移植肾肾病

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