HnRNP B特异性SiRNA对肺癌A549细胞端粒酶和细胞周期、凋亡的影响

摘要

目的:端粒酶(telomerase)是维持细胞端粒长度的逆转录酶，在肺癌细胞株及肺癌组织端粒酶活性表达明显增高。研究证实，hnRNP B<,1>(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein B<,1>)与端粒重复序列连接，在单链端粒重复或端粒酶RNA与其它双链DNA片断中起着连接分子的作用，hnRNP B<,1>可能通过调节端粒酶活性参与肺癌细胞的增殖。本课题研究hnRNP B<,1>特异性小分子干扰RNA(SiRNA)对肺癌A549细胞HnRNPBl基因表达、端粒酶RNA(human telomerase RNA，hTR)、端粒酶活性及细胞周期、凋亡的影响，为进一步探讨hnRNP B<,1>与肺癌细胞端粒酶的关系提供实验依据。 方法: 选用4组经hnRNP B<,1>特异性SiRNA转染的人肺癌A549细胞作为实验组，同时设经空质粒转染的人肺癌A549细胞、人肺癌A549细胞两组作为对照组。用RT-PCR检测靶基因hnRNP B<,1> mRNA和hTR mRNA的表达，TRAP-ELISA检测细胞端粒酶活性，流式细胞仪检测细胞周期、凋亡。观察hnRNP B<,1>特异性SiRNA对A549细胞hnRNP B<,1>、hTR、端粒酶活性、细胞增殖和细胞凋亡的影响。 结果: (1)实验组细胞hnRNP B<,1> mRNA表达降低，抑制率分别为77.69％、74.37％、75.65％和83.04％。 (2)实验组细胞hTR mRNA的表达降低，抑制率分别为79.45％、65.35％、60.00％、73.55％。 (3)实验组细胞端粒酶活性分别为(0.3017±0.021)、(0.4833±0.017)、(0.5201±0.012)、(0.3305±0.042)，与对照组(1.1597±0.6719)、(1.1556±0.2324)相比明显降低。 (4)实验组细胞中，G1细胞增多，S期细胞减少，细胞周期阻滞在G1期。 (5)实验组细胞凋亡率分别为(18.26±0.52)％、(21.10±1.54)％、(19.77±3.02)％、(31.13±3.07)％，与对照组(7.3±1.42)％、(9.3±1.45)％相比明显增高。 (6)HnRNP B<,1> mRNA表达与hTRmRNA表达的相关系数r=0.986，成明显的正相关：hnRNP B<,1> mRNA表达与端粒酶活性的相关系数r=0.954，成明显的正相关。 (7)HTR mRNA表达与端粒酶活性的相关系数r=0.971，成明显的正相关。 (8)端粒酶活性与细胞凋亡率的相关系数r=-0.836，成明显的负相关。 结论: (1)HnRNP B<,1>特异性SiRNA能抑制肺癌A549细胞HnRNP B<,1>基因表达。 (2)HnRNP B<,1>特异性SiRNA能抑制肺癌A549细胞端粒酶RNA的表达，降低肺癌A549细胞端粒酶活性。 (3)HnRNP B<,1>特异性SiRNA能抑制肺癌A549细胞增殖并诱导其凋亡。 (4)hnRNP B<,1>可通过调节端粒酶活性参与肺癌细胞的增殖与凋亡。

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结论

参考文献

文献综述 端粒酶活性抑制与肿瘤研究进展

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