重组EPO-Fc融合蛋白对恒河猴的长期毒性和免疫原性研究

摘要

目的：重组人EPO-Fc是从衍生的CHO培养液中提取，由人EPO、肽接头和人：IgG Fc段重组形成的融合蛋白，属于新一代的EPO产品的生物技术药物。目前其毒性反应和免疫原性尚未见报道。本研究以恒河猴为实验模型，观察EPO-Fc对其主要器官和系统的毒性反应，确定其毒性作用的靶器官和损害的可逆性；并通过检测用药期间和恢复期血清中抗．EPO-Fc的结合抗体和中和抗体，判断该产品免疫原性的强弱，为确定中和抗体对临床疗效的潜在影响提供科学依据。 方法：恒河猴长期毒性试验分为EPO-Fc高、中、低三个剂量组(80、25、8μg·kg<'-1>)和一个PBS溶剂对照组，每组6只，雌雄各半。皮下注射给予受试品，每周一次，连续24周。末次给药后24小时内处死三分之二的动物进行病理解剖和组织学检查，剩余动物停药后继续观察8周后处理同上。试验期间的观察体征和检测指标包括：一般生理情况观察、血液学、血生化、血电解质、血流变、心电图、粪尿、眼底检查、骨髓检查，病理组织学、补体、免疫复合物、免疫球蛋白、血清结合抗体(ELISA桥法)等各项检测，分别于给药期及恢复期的不同时点进行。 结果：动物按中、高剂量给予受试物后，均能引起红细胞(RBC)、网织红细胞计数(RET)的明显上升，并引起相应的红细胞压积(HCT)和血红蛋白(HGB)明显上升，以及血流变指标的改变，表现为高剂量组全血粘度值和全血高切、低切指数的升高；高、中、低三个剂量组的血沉降低。这些改变与EPO-Fc的药理学作用有关。血凝检查发现中、高剂量组凝血酶原时间(PT)和活化部分凝血酶时间(APTT)延长；给药第2周起，低剂量组有1只动物抗体检测阳性。第5周，低、高剂量各有2只动物呈抗体阳性，至给药第18周，低、中、高剂量组动物抗体阳性率分别为100％、83％、100％。恢复期，抗体滴度逐渐降低。给药组动物CD3、CD8、CD20等免疫相关因子以及补体、免疫复合物和IgG、IgM均未见异常。动物的一般生理状况、症状体征、行为活动、血液生化、电解质，粪尿指标、心电图、骨髓及眼底检查均未见明显异常，各项指标的检测值均在正常参考值范围之内，病理组织学检查未见与EPO-Fc及EPO-Fc抗体相关的异常。 结论：长期给予EPO-Fc对恒河猴主要生命器官和系统无明显毒性，其安全剂量为80μg·kg<'-1>；EPO-Fc对恒河猴具有一定的免疫原性，产生的抗体可部分中和药物活性，未出现免疫毒性作用。

目录

声明

前言

1材料和方法

2试验结果

2.1一般生理状况

2.2血液学检查

2.3血凝指标

2.4血液流变学

2.5血液生化和电解质

2.6心电图检查

2.7粪尿检查

2.8骨髓检查

2.9眼底检查

2.10血清抗体

2.11免疫毒性指标

2.12脏器系数与病理组织学检查

3讨论

4结论

参考文献

综述　治疗用蛋白的免疫原性

附录

致谢