小鼠Znf313基因的表达及斑马鱼同源基因Znf313克隆和表达的初步分析

摘要

第一部分：ZNF313基因是我室近年来克隆的与精子发生相关的锌指蛋白基因，并且同时含有C2H2和C3HC4锌指结构域的锌指蛋白这是极少见的，探讨该基因及其同源基因的表达和功能就具有重要的作用。 运用同源性分析和RACE等方法已经克隆得到了小鼠Znf313基因，作为人ZNF313的同源基因，小鼠Znf313也同时含有C2H2、ringfinger结构域，Northern杂交分析结果显示Znf313有一个多组织表达的约2.16kb的转录本，为了进一步研究小鼠Znf313基因的表达情况，我们进行了小鼠多组织及各发育时期睾丸组织的RT-PCR，为了检测小鼠Znf313基因产物的表达情况，我们进行了Western blot和亚细胞定位分析。小鼠多组织RT-PCR分析结果显示，在所检测的各种组织中均可见预期的364bp的片段，通过各发育时期睾丸组织的RT-PCR分析结果显示，Znf313基因可在发育各时期的睾丸组织中得到检测。蛋白免疫印记分析结果显示，在所检测得组织中均可见Znf313蛋白的表达。亚细胞定位结果显示，pZnf313-EGFP融合蛋白在HEK293T和3T3细胞中高效表达，且优先定位核内，以上证据均显示该基因在转录调控和精子发生中起着基础的作用。 第二部分：生物在进化过程中具有保守性，研究表明同源基因往往具有相同或相似的功能，使得模式生物成为研究基因功能的重要平台。作为一种新型的模式生物，斑马鱼被广泛的应用于发育遗传学的研究中。 运用Blast分析，RT-PCR和RACE等方法克隆得到了斑马鱼Znf313基因。斑马鱼Znf313基因的cDNA全长1241bp，编码221个氨基酸的蛋白质，同时含有C3HC4和C2H2锌指结构域。与人ZNF313基因的核酸及氨基酸同源性分别为54.56％和48.91％，该基因定位于斑马鱼的第16号染色体上。斑马鱼多组织RT-PCR结果显示该基因广泛的表达于斑马鱼各种组织中。整胚原位杂交结果显示该基因从胚胎受精至胚胎成熟各阶段始终在体轴形成的部位中表达。亚细胞定位结果显示，pZnf313-EGFP融合蛋白在HEK293T和3T3细胞中高效表达，且优先定位核内，以上结果均预示着Znf313基因在胚胎发育过程中可能具有较重要的功能。

目录

声明

前言

第一部分小鼠Znf313基因的表达分析

材料和方法

结果

讨论

第二部分斑马鱼Znf313基因克隆和表达的初步分析

材料和方法

结果

讨论

参考文献

全文总结

文献综述：模式生物斑马鱼及NODAL信号在其胚胎发育中的作用

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