整合素avβ单克隆抗体对子宫内膜异位症治疗作用的研究

摘要

研究背景：子宫内膜异位症(endometriosisEM，简称内异症)是指在子宫内膜以外的部位出现子宫内膜腺体和基质细胞。主要引起不孕、月经紊乱、痛经等，在育龄妇女中发病率为10％-15％，其发病机制尚不明确，缺少有效的治疗方法。整合素avβ3是细胞膜上的一种糖蛋白，具有使细胞－细胞外基质黏附、血小板聚集、免疫、组织修复、肿瘤侵润、血管生长等功能。肿瘤的血管新生及转移与具有功能活性的整合素avβ3有关。现普遍认为EM患者子宫内膜细胞具有黏附、侵袭和血管新生等类似恶性肿瘤的生物学行为，有效的阻断这一环节有可能成为治疗子宫内膜异位症的新途径。本文主要在细胞及动物水平探讨整合素avβ3单克隆抗体对子宫内膜异位症的治疗作用。 研究目的：研究整合素avβ3单克隆抗体对EM患者在位内膜细胞黏附作用的影响。探讨整合素avβ3单克隆抗体对EM患者在位内膜组织对鸡胚尿囊膜促血管生成过程的抑制作用。建立SCID小鼠EM动物模型，观察整合素avβ3单克隆抗体对小鼠移植异位病灶生长的抑制作用。 材料和方法：1、取3例EM患者在位内膜进行原代细胞培养。将浓度为1×104/m1细胞悬液置于用纤维结合蛋白(Fibronectin，FN)包被的96孔培养板，每孔100ul。抗体为整合素avβ3单克隆抗体Lm609和7E3，抗体浓度分别为80ug/ml、40ug/ml、20ug/ml，10ug/ml，空白对照加同体积PBS。每个浓度重复3个孔。37℃孵育1小时后。每孔加15u1MTT，继续孵育4小时。弃去液体，每孔加100ulDMSO，震荡20分钟。在492nm波长测每个孔的OD值。每例细胞重复3次实验。 2、1例EM患者在位内膜，剪成1mm3小块。选取60枚9日龄鸡胚，鸡胚分为3组，一组为空白对照，另两组将标本置于尿囊膜上。一组加PBS，一组加Lm609。2天后取出尿囊膜，观察血管生长情况。 3、10只SCID小鼠分2组。取4例EM患者在位内膜标本，混合剪碎成1mm3组织块。治疗组组织块先与Lm609对照组与PBS共孵育后，分别注入小鼠腹部皮下，一周后，治疗组尾静脉注射Lm609，每周2次，每次250ug；对照组注射相应体积PBS。治疗3周后处死小鼠，测量标本，用免疫组化法测微血管密度。 结果：1、与抗体共孵育的内膜细胞黏附能力低于对照组(P＜0.05)。各浓度之间无差异(P＞0.05)。 2、鸡胚尿囊膜加组织块组血管生成强于空白对照组(P＜0.05)，抗体治疗组血管生成弱于对照组(P＜0.05)。 3、抗体治疗组小鼠的异位病灶重量、体积及血管密度均低于对照组。 结论：1、整合素avβ3单克隆抗体Lm609和7E3能抑制EM患者在位内膜细胞的黏附功能。 2、EM患者在位内膜组织有血管生成的能力，Lm609能抑制EM患者在位内膜组织的促血管生成作用。 3、Lm609对SCID小鼠EM异位病灶的形成有抑制作用，治疗组病灶的体积、重量均低于对照组，其作用可能是通过抑制异位病灶的血管生成。

目录

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缩略词表

Abstract

前言

第一部分整合素a v β3单克隆抗体对子宫内膜细胞黏附作用的影响

第二部分整合素a v β3单克隆抗体对子宫内膜组织促鸡胚尿囊膜血管生成的抑制用

第三部分整合素a v β3单克隆抗体对SCID小鼠模型子宫内膜异位移植病灶抑制作用

参考文献

子宫内膜异位症治疗新机制及进展

附图1

附图2

硕士期间发表论文

致谢