定量PCR应用于柯萨奇B病毒检测及抗病毒药的研究

摘要

目的:通过建立一种竞争法定量PCR(Quantitative-Competitive PCR,QC-PCR),定量检测CVB3感染小鼠血中的CVB3 RNA,研究苦参中抗CVB有效成分对VM产生治疗作用的机制——抗病毒作用以及作用的量效关系.为抗柯注射液的临床应用提供基础理论依据.方法:1.竞争法定量PCR的方法学建立:首先以重叠突变延伸法合成一个内含突变点即BamHI酶切位点的内参DNA片段,且与待测病毒的目的扩增基因序列相似,仅一个碱基的差异;然后,将它与由CVB逆转录而业的样本cDNA共同作PCR扩增;扩增产物以BamHI酶切分离;最后根据已知量的内参业计算待测样本CVB RNA的量.2.对竞争法定量PCR的评价及证实抗柯注射液的抗病毒作用:检测CVB3病毒原液的感染滴度TCID<,50>,然后将其作10倍梯度稀释,以QC-PCR检测每一个稀释度的CVB3 RNA量.结结果作相关回归分析.结论:1.竞争法定量PCR与传统的空斑法和TCID<,50>检测结果一致,但比后者更敏感、精确、快速,因而可能有助于病毒的致病机理和在体内外筛选抗病毒药物的研究.2.抗柯注射液具有抑制柯萨奇病毒的复制和感染的作用,并且对后者的抑制作用更强,具有很好的量效关系,以定量PCR测得抗柯注射液的最小有效量为10mg/kg.d<'-1>.因而,抗柯注射液可能成为一种很有前途的治疗病毒性心肌炎的抗病毒药.

目录

前言

第一部分定量PCR检测CVB3RNA的方法建立

前言

材料与方法

结果

讨论

第二部分定量PCR用于抗柯注射液药效学研究

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

已刊文章目录

致谢

综述