一氧化氮合酶基因治疗门静脉高压症的实验研究

摘要

由于肝窦内皮细胞受损后eNOS的表达活性较低,而在三种NOS类型中以iNOS的表达活性较高,故我们选择iNOS为治疗基因,首先构建了PCA<,13>/FasL-IRES-iNOS多顺反子腺病毒表达载体用于腺病毒包装,以进一步研究FasL所起的免疫豁免作用对延长腺病毒为载体的目的基因表达时间的影响;同时构建了PCDNA<,13>/iNOS真核表达质粒,以脂质体介导体内外转染分离培养的SEC及门静脉高压鼠,观察iNOS基因在靶细胞中的表达及其对门静脉压力的影响,为PHT上消化道出血的预防和治疗寻找一种可行的基因治疗手段.应用多步亚克隆技术,成功构建了多顺反子腺病毒表达载体PCA<,13>/FasL-IRES-iNOS和真核表达质粒PCDNA<,13>/iNOS;成功地进行了SEC的体外分离和培养,SEC的生长时间、细胞活力和纯度达到或超过文献报道的水平;构建的质粒通过脂质体介导体外转染SEC,能表达相应的mRNA和iNOS蛋白;用真核表达质粒PCDNA<,13>/iNOS在门静脉高压症大鼠门静脉内注射可提高肝内iNOS表达,增加NO的产量,促使肝窦舒张,降低肝内阻力和门静脉压力.因此,NOS基因转移治疗有望成为一种预防门静脉高压症食管胃底静脉曲张出血的有效方法.

目录

前言

第二部分肝窦内皮细胞的分离和培养

第四部分脂质体介导iNOS基因转移治疗肝硬化门静脉高压症的实验研究

结论

参考文献

致谢

综述一基因疗法在肝脏外科的应用

综述二肝肺综合症发病机理与诊治进展

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