TNF-α和BMP-2诱导人皮肤成纤维细胞表达成骨细胞表型中基因的差异表达

摘要

【目的】骨形成是一个复杂的过程,是由细胞募集、增殖、骨分泌和成熟以及矿化一系列连续发生发展的过程.细胞因子、靶细胞和成骨微环境是骨形成三个重要条件.皮肤成纤维细胞体外在一定浓度TNF-α和BMP-2联合诱导下能表达成骨细胞表型,但其中的调控机制不明确.目前对调控机制的研究多局限于某一或某几个方面,而不能对整个系统有一个前面的了解.基因芯片技术是一个新兴的技术,具有简便、高效、高通量和能获取大量信息等特点,运用基因芯片技术筛选联合诱导过程(细胞增殖期、骨基质分泌和成熟期)中差异表达的基因,并对它们进行分析,筛选出候选基因,进行验证,从而对整个调控机制进行较全面的研究,进而阐明调控机制.【方法】采集儿童皮肤标本,分离制备皮肤成纤维细胞,用基础培养液和条件培养液进行培养.通过检测成骨细胞表型标志碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(OC)来选择增殖期和骨分泌成熟期的细胞,抽提总RNA,运用BioDoorChip人基因芯片筛选差异表达的基因,利用GenePro 3000软件分析差异表达的基因,然后使用Genebank、Unigene等数据库分析基因的功能,筛选出候选基因.【结论】1.在增殖期(d3)共有193条基因差异表达,其中141条基因表达下调,52条基因表达上调.经过筛选我们发现MADD、LAMA4、MAML1、CSRP1、TAGLN基因可能在皮肤成纤维细胞转化过程起重要作用,调控机制仍需进一步研究.2.在骨基质分泌和成熟期(d15)共有491个基因差异表达,其中235个基因表达上调,256个基因表达下调.筛选出差异表达基因数目比在增殖期增加许多,并且主要是关于代谢、细胞骨架和细胞运动、细胞信号以及与受体有关的基因.这其中功能比较重要的基因有:TNFAIP3、BMPⅡ、IL15、ENO3、SOX4、C4r和C7等.除了筛选出已报道的成骨细胞表达的基因外,还筛选出未曾报道基因以及目前功能不明确的基因,需要进一步验证.

目录

TNF-α和BMP-2诱导人皮肤成纤维细胞表达成骨细胞表型

TNF-α和BMP-2诱导人皮肤成纤维细胞增殖期(诱导d3)基因的差异表达

TNF-α和BMP-2诱导人皮肤成纤维细胞骨分泌和成熟期(诱导d15)基因的差异表达

结 论

参考文献

致 谢

综述