突变型TNF-α基因和提高抗原TNF-α基因表达量的方法

摘要

本发明公开了碱基组成如SEQ ID NO 7所示的突变型TNF‑α基因和抗原TNF‑α基因表达的方法，包括以下步骤：以人分泌型TNF‑α基因cDNA克隆为模板，以引物SEQ ID NO 1和SEQ ID NO 2进行扩增，得到扩增产物T1；以引物SEQ ID NO 3和SEQ ID NO 4进行扩增，得到扩增产物T2；以扩增产物T1和T2为模板，以SEQ ID NO 1和SEQ ID NO 4为引物，进行重叠PCR扩增，得到突变型TNF‑α基因；双酶切突变型TNF‑α基因后，插入pET28a表达载体中，然后转化大肠杆菌；诱导培养，得到TNF‑α蛋白。本发明将TNF‑α基因中两对相距较近的大肠杆菌稀有密码子突变为大肠杆菌偏爱密码子，密码子优化后的TNF‑α基因表达量提高了至少1.5倍。